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一、范围
本标准适用于黑果枸杞中原花青素含量的测定。

二、引用标准
GB/T 6682 分析化学实验室水质规范及评价标准
GB/T 20394 食品安全国家标准 食品中原花青素的测定 高效液相色谱法
GB/T 22223 食品安全国家标准 食品中总黄酮的测定 高效液相色谱法
GB/T 22224 食品安全国家标准 食品中花青素类化合物的测定 高效液相色谱法
GB/T 22225 食品安全国家标准 食品中类黄酮的测定 高效液相色谱法

三、原理
样品经提取后，采用高效液相色谱法分离，检测器采用紫外检测器，测定原花青素的含量。

四、仪器和设备
1.高效液相色谱仪
2.分液漏斗
3.移液器
4.量筒
5.磁力搅拌器
6.超声波清洗器
7.离心机

五、试剂和材料
1.甲醇
2.乙腈
3.磷酸二氢钾
4.磷酸氢二钠
5.乙酸
6.黑果枸杞样品

六、操作步骤
1.样品制备
取适量黑果枸杞样品，粉碎后过筛，称取0.5g，加入50mL甲醇，超声提取30min，离心10min，取上清液，再加入50mL甲醇，超声提取30min，离心10min，取上清液，合并上清液，用甲醇定容至100mL，过滤，取滤液备用。
2.色谱条件
色谱柱：C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）
流动相：A液为0.1%磷酸二氢钾水溶液，B液为乙腈
梯度洗脱程序：0-10min，A：B=90:10；10-20min，A：B=80:20；20-30min，A：B=70:30；30-40min，A：B=60:40；40-50min，A：B=50:50；50-60min，A：B=40:60；60-70min，A：B=30:70；70-80min，A：B=20:80；80-90min，A：B=10:90；90-100min，A：B=0:100
流速：1.0mL/min
检测波长：520nm
进样量：20μL
柱温：25℃
3.标准曲线制备
取一定量的原花青素标准品，加入甲醇中制成不同浓度的标准溶液，分别进行色谱分析，得到标准曲线。
4.样品测定
取适量样品提取液，进行色谱分析，根据标准曲线计算原花青素的含量。

七、结果计算
样品中原花青素的含量，按下式计算：
C=（A×V×D）/（ε×m）
式中：
C——原花青素的含量，mg/kg；
A——样品中原花青素的峰面积；
V——取样体积，mL；
D——稀释倍数；
ε——原花青素的摩尔吸光系数，为1.0×10^4；
m——样品质量，g。

八、精密度和准确度
本方法的精密度和准确度参照GB/T 20394 食品中原花青素的测定 高效液相色谱法。

九、质量控制
1.样品提取过程中，应注意避免光照和氧化。
2.色谱柱使用前应洗涤，保证柱效。
3.样品测定前，应进行系统适应性试验，保证仪器正常工作。

相关标准：
GB/T 20394 食品安全国家标准 食品中原花青素的测定 高效液相色谱法
GB/T 22223 食品安全国家标准 食品中总黄酮的测定 高效液相色谱法
GB/T 22224 食品安全国家标准 食品中花青素类化合物的测定 高效液相色谱法
GB/T 22225 食品安全国家标准 食品中类黄酮的测定 高效液相色谱法
GB/T 6682 分析化学实验室水质规范及评价标准