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布鲁氏菌是一种能够引起布鲁氏病的细菌，常见于家畜和野生动物中。生鲜乳中如果含有布鲁氏菌，会对人体健康造成威胁。因此，对生鲜乳中的布鲁氏菌进行检测是非常必要的。

本标准采用PCR技术进行检测，具体步骤如下：

1. 样品的制备

将生鲜乳样品取1mL，加入1mL的PBS缓冲液中，混匀后离心，弃去上清液，留下沉淀。

2. DNA的提取

将沉淀加入200μL的TE缓冲液中，加入10μL的蛋白酶K，65℃水浴处理30min，然后加入200μL的酚/氯仿（1:1）混合液，振荡混匀，离心5min，取上清液，加入等体积的冷乙醇，混匀后放置-20℃冷冻保存30min，离心10min，弃去上清液，将沉淀用70%乙醇洗涤一次，离心干燥，加入50μL的TE缓冲液中，混匀后放置4℃保存备用。

3. PCR反应

将提取的DNA加入PCR反应管中，加入PCR反应液，进行PCR扩增。PCR反应液的配制如下：

①10×PCR Buffer 2.5μL
②25mM MgCl2 2.5μL
③10mM dNTPs 1.0μL
④10μM引物1 1.0μL
⑤10μM引物2 1.0μL
⑥Taq DNA聚合酶 0.25μL
⑦DNA模板 2.0μL
⑧去离子水 15.75μL

PCR反应条件如下：

①预变性 94℃ 5min
②变性 94℃ 30s
③退火 55℃ 30s
④延伸 72℃ 30s
⑤最终延伸 72℃ 10min

4. PCR产物检测

将PCR产物进行凝胶电泳检测，检测结果为阳性时，说明样品中存在布鲁氏菌。

相关标准：
GB/T 4789.2-2016 食品微生物学检验 第2部分：肠道致病菌检验
GB/T 4789.3-2016 食品微生物学检验 第3部分：耐热性芽孢杆菌检验
GB/T 4789.4-2016 食品微生物学检验 第4部分：大肠杆菌检验
GB/T 4789.5-2016 食品微生物学检验 第5部分：金黄色葡萄球菌检验
GB/T 4789.10-2016 食品微生物学检验 第10部分：真菌和酵母菌检验