绵羊是我国重要的畜牧业生产动物之一,其胚胎玻璃化冷冻保存技术的研究和应用对于畜牧业的发展具有重要意义。本标准旨在规范绵羊胚胎玻璃化冷冻保存技术的操作流程,提高保存效果和胚胎存活率。
1. 胚胎采集
1.1 选择优质母羊进行胚胎采集,母羊应处于发情期。
1.2 采用人工授精或自然交配的方式获得受精卵。
1.3 采用外科手术或经阴道取卵的方式采集胚胎。
2. 胚胎处理
2.1 采集的胚胎应立即放入生理盐水中清洗,去除附着在胚胎表面的血液和组织碎片。
2.2 采用显微镜检查胚胎的发育情况和品质,选择发育良好、品质优良的胚胎进行后续处理。
2.3 采用PBS液体进行胚胎的处理,包括去除卵黄囊、去除外层细胞和去除内细胞团等步骤。
3. 玻璃化冷冻
3.1 采用玻璃化冷冻法进行胚胎保存。
3.2 采用含有10% DMSO和20% EG的PBS液体进行胚胎的预处理。
3.3 采用含有20% DMSO、20% EG和0.5 M甘露醇的PBS液体进行胚胎的玻璃化处理。
3.4 采用液氮进行胚胎的冷冻保存。
4. 保存和复苏
4.1 采用液氮罐进行胚胎的长期保存。
4.2 采用快速复苏法进行胚胎的复苏,包括将胚胎迅速放入37℃的PBS液体中,然后逐渐加入含有10% DMSO和20% EG的PBS液体,最后将胚胎移入含有20% DMSO、20% EG和0.5 M甘露醇的PBS液体中。
相关标准
GB/T 19633-2019 畜禽胚胎冷冻保存技术规范
GB/T 19634-2019 畜禽胚胎移植技术规范
GB/T 19635-2019 畜禽胚胎培养技术规范
GB/T 19636-2019 畜禽胚胎质量评价技术规范
GB/T 19637-2019 畜禽胚胎植入技术规范