一、范围
本标准适用于测定枸杞中总黄酮含量的方法。

二、引用标准
GB/T 6682 分析化学实验室用水质量规格及评价方法
GB/T 20394 食品中总黄酮的测定 高效液相色谱法

三、仪器设备
1. 高效液相色谱仪：具有紫外检测器和色谱柱恒温箱。
2. 称量器：精度为0.1mg。
3. 超声波清洗器：功率为100W。

四、试剂和材料
1. 甲醇：色谱纯。
2. 乙腈：色谱纯。
3. 磷酸二氢钾：分析纯。
4. 磷酸氢二钠：分析纯。
5. 枸杞样品：经过研磨后，过筛，粒度均匀。

五、操作步骤
1. 取适量的枸杞样品，称量0.5g，加入50ml甲醇中，超声波清洗10分钟，过滤，取滤液10ml，加入50ml乙腈中，超声波清洗10分钟，过滤，取滤液10ml，即为待测样品。
2. 取适量的磷酸二氢钾，加入100ml水中，溶解，调节pH至2.5，加入乙腈至1000ml，混合均匀，即为磷酸盐缓冲液。
3. 取适量的磷酸氢二钠，加入100ml水中，溶解，加入甲醇至1000ml，混合均匀，即为甲醇溶液。
4. 取适量的总黄酮标准品，加入甲醇中，制备成1mg/ml的标准溶液。
5. 取适量的待测样品和总黄酮标准品，分别注入高效液相色谱仪中，采用C18色谱柱，流动相为甲醇-磷酸盐缓冲液（30:70），流速为1.0ml/min，检测波长为360nm，记录峰面积。
6. 根据总黄酮标准品的峰面积制作标准曲线，计算待测样品中总黄酮的含量。

六、结果计算
总黄酮含量的计算公式为：
总黄酮含量（mg/g）=（样品峰面积/标准品峰面积）×标准品浓度×稀释倍数/样品质量

七、质量控制
1. 标准品的制备应严格按照标准要求进行。
2. 每个样品应进行两次测定，结果的相对标准偏差应小于5%。
3. 每天开始测定前，应进行仪器的空白检测和性能检测。

相关标准
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GB/T 5009.5 食品中粗蛋白的测定