青海藏羊是我国特有的一种羊种，其肉质鲜美，营养丰富，深受消费者的喜爱。为了保护和发展青海藏羊资源，提高其养殖效益，近年来，人们开始研究青海藏羊的繁殖技术。其中，胚胎玻璃化冷冻技术是一项重要的技术手段，可以有效地保存青海藏羊的优良基因，促进其良种繁殖。为了规范青海藏羊胚胎玻璃化冷冻的制作过程，保证其质量和效果，制定了本标准。

1.范围
本标准适用于青海藏羊胚胎玻璃化冷冻的制作过程。

2.术语和定义
2.1 胚胎：指受精卵发育到囊胚阶段的胚胎。
2.2 玻璃化冷冻：指将胚胎在低温下迅速冷冻至-196℃，使其变为玻璃状状态，以达到长期保存的目的。
2.3 质量控制：指在制作过程中对胚胎、培养液、冷冻液等进行检测和控制，以保证制作出的玻璃化胚胎的质量和效果。

3.制作方法
3.1 胚胎采集
采用超声波技术或手术方法采集青海藏羊的胚胎，将其置于含有培养液的离心管中，进行培养。

3.2 胚胎培养
将采集到的胚胎置于含有培养液的离心管中，进行培养。培养液的配方为：NaCl 0.9g/mL，KCl 0.04g/mL，CaCl2 0.02g/mL，MgSO4 0.01g/mL，NaHCO3 0.035g/mL，HEPES 0.01g/mL，胰岛素 10ug/mL，转铁蛋白 10ug/mL，胆固醇 1ug/mL，牛血清 10%。培养条件为：温度为38.5℃，CO2浓度为5%。

3.3 胚胎处理
将培养好的胚胎进行处理，去除不健康的胚胎和多余的细胞，留下健康的胚胎。

3.4 玻璃化冷冻
将处理好的胚胎置于含有冷冻液的离心管中，进行玻璃化冷冻。冷冻液的配方为：DMSO 10%，EG 10%，胰岛素 10ug/mL，转铁蛋白 10ug/mL，胆固醇 1ug/mL，培养液 80%。冷冻条件为：先将离心管放置于-7℃的冷冻盒中，等离心管内液体温度降至-7℃后，再将离心管放置于-30℃的冷冻盒中，等离心管内液体温度降至-30℃后，再将离心管放置于液氮中进行玻璃化冷冻。

4.操作要求
4.1 操作人员应具备相关的胚胎玻璃化冷冻技术知识和操作技能，严格按照本标准的要求进行操作。
4.2 胚胎采集、培养、处理和冷冻过程中，应注意无菌操作，避免污染。
4.3 胚胎的采集、培养、处理和冷冻应在规定的时间内完成，以保证胚胎的质量和效果。
4.4 胚胎的采集、培养、处理和冷冻过程中，应注意温度的控制，避免胚胎受到过度的温度变化。

5.质量控制
5.1 对采集到的胚胎进行检测，筛选出健康的胚胎进行培养和处理。
5.2 对培养液、冷冻液等进行检测和控制，保证其质量和效果。
5.3 对玻璃化胚胎进行检测，保证其质量和效果。

相关标准
GB/T 19633-2005 动物胚胎玻璃化冷冻技术规范
GB/T 19634-2005 动物胚胎玻璃化冷冻质量控制规范
GB/T 19635-2005 动物胚胎玻璃化冷冻操作规范
GB/T 19636-2005 动物胚胎玻璃化冷冻设备规范
GB/T 19637-2005 动物胚胎玻璃化冷冻术语