HCV病毒是一种引起肝炎的病毒，目前全球感染人数已经超过7000万。为了研究HCV病毒的感染机制和寻找治疗方法，需要建立可靠的HCV病毒感染模型。实验树鼩是一种常用的实验动物，其肝脏结构和功能与人类相似，因此被广泛应用于肝脏疾病的研究中。本标准旨在规定使用实验树鼩原代肝细胞制作HCV病毒感染模型的方法和要求，以提高HCV病毒感染模型的可靠性和稳定性。

1. 实验树鼩原代肝细胞的制备
1.1 实验树鼩原代肝细胞的采集
实验树鼩原代肝细胞的采集应在无菌条件下进行。首先将实验树鼩处于麻醉状态下，然后取出肝脏，用无菌PBS缓冲液冲洗去血液和胆汁，然后将肝脏切成小块，用胰酶和DNA酶消化，最后通过筛网过滤得到单个肝细胞。

1.2 实验树鼩原代肝细胞的培养
将采集到的实验树鼩原代肝细胞放入含有10%胎牛血清的DMEM培养基中，加入适量的青霉素和链霉素，放入37℃的恒温培养箱中培养。每隔2-3天更换一次培养基，直至细胞密度达到80%以上。

2. HCV病毒感染模型的制备
2.1 HCV病毒的制备
使用已知的HCV病毒株，通过细胞培养和超离心等方法制备HCV病毒悬液。

2.2 HCV病毒感染模型的制备
将培养好的实验树鼩原代肝细胞分成两组，一组为对照组，另一组加入适量的HCV病毒悬液，使其感染。感染后的细胞应在37℃的恒温培养箱中继续培养，每隔2-3天更换一次培养基。

3. HCV病毒感染模型的评价
3.1 HCV病毒感染模型的检测
使用PCR等方法检测感染后的实验树鼩原代肝细胞中是否存在HCV病毒RNA。

3.2 HCV病毒感染模型的评价
通过检测感染后的实验树鼩原代肝细胞中HCV病毒RNA的表达水平、细胞增殖情况、细胞凋亡情况等指标，评价HCV病毒感染模型的可靠性和稳定性。

相关标准
GB/T 16886.1-2017 微生物学 实验室动物 部分1：一般要求
GB/T 16886.2-2017 微生物学 实验室动物 部分2：实验室鼠
GB/T 16886.3-2017 微生物学 实验室动物 部分3：实验室兔
GB/T 16886.4-2017 微生物学 实验室动物 部分4：实验室犬
GB/T 16886.5-2017 微生物学 实验室动物 部分5：实验室猴