DB53/T 441-2012
甘蔗种苗宿根矮化病菌检测技术规程
发布时间:2012-12-01 实施时间:2013-03-01
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甘蔗是我国重要的经济作物之一,但宿根矮化病是甘蔗生产中的一大难题。为了保证甘蔗种苗的质量,防止宿根矮化病的传播,制定本标准。
1.适用范围
本标准适用于甘蔗种苗宿根矮化病菌的检测。
2.术语和定义
2.1 宿根矮化病菌:引起甘蔗宿根矮化病的病原菌。
2.2 样品:甘蔗种苗或其它相关材料。
2.3 阳性对照:已知含有宿根矮化病菌的样品。
2.4 阴性对照:未含有宿根矮化病菌的样品。
3.检测方法
3.1 样品采集
从甘蔗种苗的根部、茎部或叶片上取样,每个样品不少于10g。
3.2 样品处理
将样品表面消毒,然后切碎或磨碎,加入适量的缓冲液,制成悬浮液。
3.3 DNA提取
采用DNA提取试剂盒提取样品中的总DNA。
3.4 PCR扩增
将提取的DNA作为模板,进行PCR扩增,扩增产物进行凝胶电泳检测。
3.5 结果判定
阳性对照出现特异性条带,阴性对照未出现特异性条带,样品中出现特异性条带则判定为阳性。
4.评定标准
4.1 灵敏度
本方法的灵敏度应达到10pg的宿根矮化病菌DNA。
4.2 特异性
本方法的特异性应达到100%。
4.3 重复性
同一实验室内,不同操作者、不同批次、不同时间的重复性应达到95%以上。
4.4 检出限
本方法的检出限应达到10^2 CFU/g。
相关标准:
GB/T 19212.1-2017 甘蔗种质资源分类和命名
GB/T 19212.2-2017 甘蔗种质资源保存
GB/T 19212.3-2017 甘蔗种质资源鉴定
GB/T 19212.4-2017 甘蔗种质资源繁殖
GB/T 19212.5-2017 甘蔗种质资源保护