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磷酸腺苷（ATP）是生物体内一种重要的能量物质，广泛存在于各种生物体内。在烟草生长和发育过程中，ATP也扮演着重要的角色。因此，研究烟草中ATP的含量对于了解烟草生长发育规律、提高烟草产量和品质具有重要意义。

本标准采用超高效液相色谱法进行鲜烟叶中ATP的测定。该方法具有灵敏度高、准确度高、重现性好等优点。具体操作步骤如下：

1. 样品的制备

取鲜烟叶样品，去除杂质，洗净后切碎，加入甲醇进行超声提取，离心后取上清液，用0.22μm滤膜过滤，即得样品。

2. 色谱条件

色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18（2.1mm×50mm，1.8μm）

流动相：A相为0.1%甲酸水溶液，B相为乙腈

梯度洗脱：0-1min，5% B；1-3min，5%-30% B；3-4min，30%-95% B；4-5min，95% B；5-5.1min，95%-5% B；5.1-6min，5% B

流速：0.3mL/min

检测波长：254nm

进样量：2μL

3. 标准曲线的绘制

取ATP标准品，分别加入甲醇制备成不同浓度的标准溶液，用同样的方法进行测定，绘制标准曲线。

4. 样品的测定

取样品，用同样的方法进行测定，根据标准曲线计算出ATP的含量。

相关标准：
GB/T 5009.60-2003 食品中磷酸腺苷酸的测定 高效液相色谱法
GB/T 5009.61-2003 食品中磷酸腺苷的测定 高效液相色谱法
GB/T 5009.62-2003 食品中磷酸腺苷二钠的测定 高效液相色谱法
GB/T 5009.63-2003 食品中磷酸腺苷三钠的测定 高效液相色谱法
GB/T 5009.64-2003 食品中磷酸腺苷四钠的测定 高效液相色谱法