DB53/T 944-2019
甘蔗抗褐锈病基因Bru1的PCR检测技术规程
发布时间:2019-09-23 实施时间:2019-12-23
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甘蔗是我国重要的经济作物之一,但褐锈病是甘蔗生产中的重要病害之一,严重影响甘蔗的产量和品质。Bru1基因是甘蔗抗褐锈病的主要基因之一,因此对Bru1基因的PCR检测技术的研究具有重要意义。
1.样品处理
样品可以是甘蔗叶片、茎秆、根部等组织,也可以是种子、芽等。样品应当新鲜、无病害、无污染。样品处理应当避免DNA的降解和污染。
2.DNA提取
DNA提取方法可以采用CTAB法、酚/氯仿法、商用DNA提取试剂盒等方法。提取的DNA应当纯度高、浓度适宜、无降解和污染。
3.PCR反应体系
PCR反应体系包括模板DNA、引物、dNTPs、Taq DNA聚合酶、缓冲液等。引物的浓度应当适宜,反应体系的总体积应当控制在20-50μL之间。
4.PCR程序
PCR程序包括预变性、变性、退火、延伸等步骤。PCR程序的参数应当根据引物的特性和反应体系的组成进行优化,以保证PCR反应的特异性和灵敏度。
5.PCR产物检测
PCR产物可以采用琼脂糖凝胶电泳、荧光定量PCR、实时荧光定量PCR等方法进行检测。PCR产物的检测应当准确、特异、灵敏。
相关标准:
GB/T 20481-2006 甘蔗品种分类和命名方法
GB/T 20482-2006 甘蔗种质资源鉴定方法
GB/T 20483-2006 甘蔗品种鉴定方法
GB/T 20484-2006 甘蔗育种技术规范
GB/T 20485-2006 甘蔗生产技术规范