桑蚕微粒子病是由桑蚕微粒子病毒引起的一种病害,主要危害桑蚕的生长发育和丝绸的产量和质量。为了及时、准确地诊断和防治桑蚕微粒子病,制定本标准。
1. 术语和定义
本标准中使用的术语和定义如下:
1.1 桑蚕微粒子病:由桑蚕微粒子病毒引起的一种病害。
1.2 检测样品:指桑蚕体液、组织、卵巢、卵、粪便等样品。
1.3 RT-PCR:反转录聚合酶链式反应,是一种检测病毒核酸的方法。
1.4 ELISA:酶联免疫吸附试验,是一种检测病毒抗原或抗体的方法。
2. 诊断技术要求
2.1 诊断方法:采用RT-PCR和ELISA两种方法进行检测。
2.2 诊断标准:采用RT-PCR和ELISA两种方法均为阳性时,方可诊断为桑蚕微粒子病。
2.3 检测样品:采用RT-PCR检测桑蚕体液、组织、卵巢、卵等样品;采用ELISA检测桑蚕血清、粪便等样品。
2.4 诊断结果报告:应包括检测方法、检测结果、样品来源、检测日期等信息。
3. 诊断技术方法
3.1 RT-PCR检测方法
3.1.1 样品处理:将样品加入离心管中,加入适量的PBS缓冲液,离心沉淀,去除上清液,加入适量的RNase-free水,冻融三次,离心沉淀,取上清液。
3.1.2 反转录:将上清液加入反转录试剂,按照试剂说明进行反转录反应。
3.1.3 PCR扩增:将反转录产物加入PCR试剂,按照试剂说明进行PCR扩增反应。
3.1.4 电泳检测:将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳,观察PCR产物条带是否符合桑蚕微粒子病毒的特异性条带。
3.2 ELISA检测方法
3.2.1 样品处理:将样品加入96孔板中,按照试剂说明进行处理。
3.2.2 检测:将样品加入96孔板中,加入适量的检测试剂,按照试剂说明进行检测。
3.2.3 读板:将96孔板放入酶标仪中,按照仪器说明进行读板。
3.2.4 判定结果:根据OD值判定样品是否为阳性。
4. 诊断结果判定标准
4.1 RT-PCR检测结果:出现特异性条带,且条带大小符合桑蚕微粒子病毒的特征条带大小,即为阳性。
4.2 ELISA检测结果:样品OD值大于阈值,即为阳性。
5. 诊断结果报告格式
5.1 报告名称:桑蚕微粒子病诊断报告。
5.2 报告内容:检测方法、检测结果、样品来源、检测日期等信息。
5.3 报告格式:应符合国家相关规定。
相关标准
GB/T 18443-2016 植物病毒检疫技术规程
GB/T 18444-2016 植物病毒检测技术规程
GB/T 18445-2016 植物病毒检测试剂盒
GB/T 18446-2016 植物病毒检测质量控制
GB/T 18447-2016 植物病毒检测结果判定标准