绵羊肺炎支原体是绵羊肺炎的主要病原体，对绵羊养殖业造成了严重的经济损失。PCR技术是一种高灵敏度、高特异性的检测方法，已经成为绵羊肺炎支原体检测的主要手段之一。为了保证检测结果的准确性和可靠性，制定本标准。

1.技术要求
1.1 仪器设备
PCR仪、电泳仪、超净工作台、离心机、移液器等。

1.2 试剂和材料
PCR试剂盒、DNA提取试剂盒、电泳试剂盒、DNA分子量标准品、绵羊肺炎支原体阳性对照菌株、无菌纯水等。

1.3 人员要求
具有PCR技术操作经验的专业人员。

2.检测方法
2.1 样品采集和处理
采集绵羊肺部分泌物或组织样品，用DNA提取试剂盒提取DNA。

2.2 PCR扩增
按照PCR试剂盒说明书进行PCR扩增，扩增条件为：95℃预变性5min，95℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，共35个循环，最后72℃延伸10min。

2.3 电泳分析
将PCR产物进行电泳分析，分析条件为：电压120V，电泳时间30min，用DNA分子量标准品进行分析。

3.结果判定
3.1 阳性判定
PCR扩增产物大小符合预期，且电泳图上有明显的特异性条带，即为阳性。

3.2 阴性判定
PCR扩增产物大小符合预期，但电泳图上无特异性条带，即为阴性。

3.3 无效判定
PCR扩增产物大小不符合预期，或电泳图上无任何条带，即为无效。

4.质量控制
4.1 阳性对照
每批次检测必须设置绵羊肺炎支原体阳性对照菌株，确保PCR扩增反应的可靠性。

4.2 负对照
每批次检测必须设置无菌纯水作为负对照，确保PCR扩增反应的特异性。

相关标准
GB/T 4789.2-2016 食品微生物学检验 沙门氏菌检验
GB/T 4789.3-2016 食品微生物学检验 肠道致病菌检验
GB/T 4789.4-2016 食品微生物学检验 耐热性大肠杆菌检验
GB/T 4789.5-2016 食品微生物学检验 菌落总数和酵母菌、霉菌总数的测定
GB/T 4789.10-2016 食品微生物学检验 食品中真菌毒素的测定