大熊猫是我国珍稀的国宝动物，其健康状况一直备受关注。轮状病毒是大熊猫常见的病原体之一，能够引起大熊猫腹泻等症状。为了及时发现和控制大熊猫轮状病毒感染，需要对其进行实验室检测。本标准规定了大熊猫轮状病毒实验室检测的RT-PCR方法，以确保检测结果的准确性和可靠性。

1. 样品采集
样品采集应在大熊猫出现腹泻等症状时进行，采集样品包括粪便、肛拭子等。采集后应立即送至实验室进行处理。

2. 核酸提取
核酸提取应在无菌条件下进行，避免污染。提取方法可以采用商用试剂盒或自制方法，但必须保证提取的核酸质量和纯度。

3. RT-PCR反应体系
RT-PCR反应体系应包括反转录酶、PCR引物、荧光探针等。反转录酶可以选择M-MLV或AMV，PCR引物和荧光探针应根据轮状病毒的保守区域设计。反应体系的配制应根据实验室的具体情况进行优化。

4. PCR程序
PCR程序应包括反转录、预变性、热变性、扩增等步骤。具体程序可以参考本标准附录A。

5. 结果判读
结果判读应根据荧光信号的阈值周期数（Ct值）进行。当Ct值小于40时，判定为阳性；当Ct值大于40时，判定为阴性。需要注意的是，阳性结果必须进行二次PCR验证，以确保结果的准确性。

相关标准
GB/T 22470-2008 大熊猫标本采集和保存规范
GB/T 22471-2008 大熊猫疾病诊断技术规范
DB51/T 1710.1-2013 大熊猫检疫技术—病原体检测技术规范—细菌检测方法
DB51/T 1710.2-2013 大熊猫检疫技术—病原体检测技术规范—病毒检测方法
DB51/T 1710.4-2013 大熊猫检疫技术—寄生虫检测技术规范—原虫检测方法