烯效唑是一种广谱杀菌剂，常用于农业生产中。为了保证农产品的质量和安全，需要对烯效唑的含量进行检测。本标准采用高效液相色谱法测定烯效唑的含量。

1. 原理
样品经提取后，采用高效液相色谱法进行分离，紫外检测器检测烯效唑的吸收峰，根据标准曲线计算出烯效唑的含量。

2. 仪器和设备
- 高效液相色谱仪
- 紫外检测器
- 称量仪
- 超声波清洗器
- 恒温振荡器

3. 试剂和材料
- 烯效唑标准品
- 甲醇
- 乙腈
- 硝酸钠
- 氯仿
- 水

4. 操作步骤
4.1 标准曲线的制备
1. 取烯效唑标准品0.1g，加入10mL甲醇中，超声波清洗器中超声波处理10min，用甲醇定容至100mL，得到1000mg/L的烯效唑标准溶液。
2. 取1000mg/L的烯效唑标准溶液1mL，加入10mL甲醇中，超声波清洗器中超声波处理10min，用甲醇定容至100mL，得到100mg/L的烯效唑标准溶液。
3. 取100mg/L的烯效唑标准溶液1mL，加入10mL甲醇中，超声波清洗器中超声波处理10min，用甲醇定容至100mL，得到10mg/L的烯效唑标准溶液。
4. 取10mg/L的烯效唑标准溶液1mL，加入10mL甲醇中，超声波清洗器中超声波处理10min，用甲醇定容至100mL，得到1mg/L的烯效唑标准溶液。
5. 取1mg/L的烯效唑标准溶液1mL，加入10mL甲醇中，超声波清洗器中超声波处理10min，用甲醇定容至100mL，得到0.1mg/L的烯效唑标准溶液。
6. 取0.1mg/L的烯效唑标准溶液1mL，加入10mL甲醇中，超声波清洗器中超声波处理10min，用甲醇定容至100mL，得到0.01mg/L的烯效唑标准溶液。
7. 取0.01mg/L的烯效唑标准溶液1mL，加入10mL甲醇中，超声波清洗器中超声波处理10min，用甲醇定容至100mL，得到0.001mg/L的烯效唑标准溶液。
8. 取0.001mg/L的烯效唑标准溶液1mL，加入10mL甲醇中，超声波清洗器中超声波处理10min，用甲醇定容至100mL，得到0.0001mg/L的烯效唑标准溶液。
9. 取0.0001mg/L的烯效唑标准溶液1mL，加入10mL甲醇中，超声波清洗器中超声波处理10min，用甲醇定容至100mL，得到0.00001mg/L的烯效唑标准溶液。
10. 取0.00001mg/L的烯效唑标准溶液1mL，加入10mL甲醇中，超声波清洗器中超声波处理10min，用甲醇定容至100mL，得到0.000001mg/L的烯效唑标准溶液。
11. 以上标准溶液均用甲醇稀释至合适浓度，制备标准曲线。

4.2 样品的制备
1. 取样品0.5g，加入50mL甲醇中，超声波清洗器中超声波处理10min，用甲醇定容至100mL，得到样品溶液。
2. 取样品溶液1mL，加入10mL甲醇中，超声波清洗器中超声波处理10min，用甲醇定容至100mL，得到样品测试溶液。

4.3 色谱条件
- 色谱柱：C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）
- 流动相：甲醇-水（70:30）
- 流速：1.0mL/min
- 柱温：30℃
- 检测波长：254nm

4.4 样品的测定
1. 用标准曲线法计算烯效唑的含量。

5. 结果计算
样品中烯效唑的含量，按下式计算：
$$
C=\frac{A}{a\times b\times d}
$$
其中，$C$为烯效唑的含量（mg/kg），$A$为样品测试溶液的峰面积，$a$为标准曲线中烯效唑的斜率，$b$为样品测试溶液的体积（mL），$d$为样品测试溶液的质量（g）。

6. 精密度和准确度
本方法的相对标准偏差（RSD）不大于5%。

7. 相关标准
- GB/T 5009.199-2017 食品中农药残留量的测定 高效液相色谱法
- GB/T 5009.198-2017 食品中农药残留量的测定 气相色谱法
- GB/T 5009.197-2017 食品中农药残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
- GB/T 5009.196-2017 食品中农药残留量的测定 液相色谱法
- GB/T 5009.195-2017 食品中农药残留量的测定 气相色谱-质谱法