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溶血性曼氏杆菌是一种常见的食源性病原菌，能够引起人和动物的感染，严重危害公共卫生。为了保障食品安全和公共卫生，需要对食品、环境和动物源性样品中的溶血性曼氏杆菌进行检测。本标准制定了一种PCR检测方法，能够快速、准确地检测样品中的溶血性曼氏杆菌。

1.范围
本标准适用于食品、环境和动物源性样品中溶血性曼氏杆菌的PCR检测。

2.检测原理
本方法采用PCR技术，利用特异性引物扩增溶血性曼氏杆菌16S rRNA基因片段，通过电泳分析扩增产物，判断样品中是否存在溶血性曼氏杆菌。

3.试剂和仪器
3.1 试剂
PCR扩增试剂盒、DNA提取试剂盒、电泳试剂盒等。
3.2 仪器
PCR扩增仪、电泳仪等。

4.样品处理
4.1 食品样品
样品经过预处理后，采用DNA提取试剂盒提取样品中的DNA。
4.2 环境和动物源性样品
样品经过预处理后，采用DNA提取试剂盒提取样品中的DNA。

5.PCR扩增
5.1 PCR反应体系
PCR反应体系如下表所示：

试剂名称 体积（μL）
PCR扩增缓冲液 5
MgCl2 2.5
dNTPs 0.5
引物F 0.5
引物R 0.5
Taq酶 0.25
模板DNA 2
ddH2O 13.25
总体积 25

5.2 PCR扩增程序
PCR扩增程序如下表所示：

步骤 温度（℃） 时间（min）
初始变性 95 5
循环扩增 95 30s
55 30s
72 30s
终止延伸 72 10

5.3 PCR扩增产物检测
将PCR扩增产物进行电泳分析，判断样品中是否存在溶血性曼氏杆菌。

6.结果判定
6.1 阳性判定
出现与预期大小相符的PCR扩增产物带，且电泳图上有特异性条带，判定为阳性。
6.2 阴性判定
未出现与预期大小相符的PCR扩增产物带，或者出现与预期大小不符的PCR扩增产物带，或者电泳图上未出现特异性条带，判定为阴性。

相关标准：
1. GB/T 4789.30-2016 食品微生物学检验 沙门氏菌检验
2. GB/T 4789.4-2016 食品微生物学检验 大肠杆菌检验
3. GB/T 4789.5-2016 食品微生物学检验 菌落总数和酵母菌、霉菌总数的测定
4. GB/T 4789.38-2016 食品微生物学检验 肠炎沙门氏菌检验
5. GB/T 4789.39-2016 食品微生物学检验 耐热性沙门氏菌检验