鸭甲肝病毒是一种常见的家禽病毒，能够引起鸭、鹅等家禽的肝脏病变和死亡。为了及时发现和控制鸭甲肝病毒的传播，需要对家禽进行抗体检测。本标准介绍了鸭甲肝病毒间接ELISA抗体检测方法的具体要求。

1.试剂
1.1 酶标板：96孔酶标板。
1.2 鸭甲肝病毒抗原：纯化的鸭甲肝病毒抗原。
1.3 抗鸭IgG-HRP：兔抗鸭IgG-HRP。
1.4 TMB底物液：含TMB底物和过氧化氢的缓冲液。
1.5 停止液：2M硫酸。

2.仪器设备
2.1 酶标仪：可测量450nm波长的酶标仪。
2.2 洗板机：可自动洗板的洗板机。
2.3 离心机：可离心96孔酶标板的离心机。

3.操作程序
3.1 样品处理
将血清样品离心，去除悬浮的颗粒物，然后将血清稀释至1:100，即取1μL血清加入99μL稀释液中，混匀后即为1:100的稀释液。

3.2 酶标板涂覆
将纯化的鸭甲肝病毒抗原稀释至1μg/mL，取100μL加入96孔酶标板中，放置于4℃过夜。

3.3 洗板
将洗板缓冲液加入洗板机中，洗板机自动洗板，重复3次。

3.4 孵育
将稀释后的血清样品加入酶标板中，每个孔加入100μL，同时加入对照血清和空白对照，放置于37℃孵育1小时。

3.5 洗板
将洗板缓冲液加入洗板机中，洗板机自动洗板，重复3次。

3.6 检测
将兔抗鸭IgG-HRP稀释至1:5000，取100μL加入每个孔中，放置于37℃孵育1小时。

3.7 洗板
将洗板缓冲液加入洗板机中，洗板机自动洗板，重复3次。

3.8 显色
将TMB底物液加入每个孔中，孔板在室温下避光反应15分钟。

3.9 停止反应
加入2M硫酸停止反应，孔板在450nm波长下测量吸光度值。

4.结果判定
4.1 对照血清
对照血清应为已知抗体水平的血清，用于判断试剂盒的稳定性和准确性。对照血清的吸光度值应在标准范围内。

4.2 空白对照
空白对照应为不含抗体的血清或缓冲液，用于判断试剂盒的特异性。空白对照的吸光度值应接近于0。

4.3 结果判定
样品的吸光度值与对照血清的吸光度值比值称为样品的OD值。OD值大于等于0.2为阳性，小于0.2为阴性。

5.质量控制
5.1 试剂的质量控制
试剂的质量应符合国家相关标准。

5.2 操作的质量控制
操作人员应经过专业培训，熟练掌握操作技能。操作过程中应注意无菌操作，避免污染。

相关标准
GB/T 22470-2008 家禽病毒性疾病防治技术规范
GB/T 22471-2008 家禽病毒性疾病诊断技术规范
GB/T 22472-2008 家禽病毒性疾病疫苗生产技术规范
GB/T 22473-2008 家禽病毒性疾病疫苗检验技术规范
GB/T 22474-2008 家禽病毒性疾病疫苗使用技术规范