多重聚合酶链反应(Multi-PCR)是一种同时检测多种病原体的分子生物学技术，具有高灵敏度、高特异性、快速、简便等优点。本标准适用于检测新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、传染性喉气管炎病毒和鸡毒支原体等禽类常见病原体。

1. 样品处理
样品可以是禽类组织、血清、粪便等，应在无菌条件下采集。组织样品应切成小块，血清样品应离心去除悬浮物，粪便样品应加入等体积的PBS缓冲液搅拌均匀。样品处理后，应在-80℃保存或立即进行DNA提取。

2. DNA提取
DNA提取方法可以采用商用试剂盒或自制方法，但必须保证提取的DNA质量和纯度。提取的DNA应在-20℃保存，避免反复冻融。

3. PCR反应体系的配制
PCR反应体系的配制应根据不同的病原体选择相应的引物和探针，以及适当的反应缓冲液、酶和模板DNA。反应体系的总体积一般为25-50μL，其中模板DNA的用量应根据样品的质量和纯度确定。

4. PCR反应程序
PCR反应程序应根据不同的引物和探针设计相应的程序，一般包括预变性、变性、退火和延伸等步骤。反应程序的温度和时间应根据引物和探针的特性确定，一般为95℃预变性2-5min，95℃变性30s，50-60℃退火30s，72℃延伸1-2min，反复循环30-40次。

5. PCR产物检测和结果判定
PCR产物可以采用琼脂糖凝胶电泳、荧光定量PCR、实时荧光定量PCR等方法进行检测。结果判定应根据PCR产物的大小、形态和荧光信号等特征进行判断，同时应设置阳性对照和阴性对照，确保结果的准确性和可靠性。

相关标准
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GB/T 4789.4-2016 食品微生物学检验 大肠杆菌检验
GB/T 4789.5-2016 食品微生物学检验 菌落总数和耐热菌检验
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GB/T 4789.10-2016 食品微生物学检验 葡萄球菌检验