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一、范围
本标准适用于反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测猪瘟毒。

二、引用标准
GB/T 6682-2008 分析化学实验室水质规范及评价方法
GB/T 14233.1-2008 检验检疫实验室技术规范 第1部分：一般规定
GB/T 14233.2-2005 检验检疫实验室技术规范 第2部分：生物安全实验室
GB/T 14233.3-2005 检验检疫实验室技术规范 第3部分：动物实验室
GB/T 14233.4-2005 检验检疫实验室技术规范 第4部分：微生物实验室

三、术语和定义
3.1 反转录聚合酶链反应(RT-PCR)
一种利用反转录酶将RNA转录成cDNA，再利用聚合酶链反应扩增cDNA的技术。

3.2 猪瘟毒
猪瘟病毒是一种病毒性疾病，属于病毒科，病毒颗粒为球形，直径约为50-100纳米。

3.3 RNA提取
将样品中的RNA分离出来的过程。

四、样品采集
4.1 样品的选择
选择疑似猪瘟病毒感染的猪的血液、组织、粪便等样品。

4.2 样品的采集
样品采集应在生物安全实验室中进行，采集前应进行消毒处理。血液样品采集后应立即加入抗凝剂，组织样品应在采集后立即放入离心管中，粪便样品应在采集后立即放入离心管中。

五、RNA提取
5.1 样品处理
样品处理应在生物安全实验室中进行，样品应在消毒后进行处理。血液样品应离心后取上清液，组织样品应切碎后加入适量的RNA提取试剂，粪便样品应加入适量的RNA提取试剂。

5.2 RNA提取试剂的选择
可选择TRIzol、RNAiso Plus等RNA提取试剂。

5.3 RNA提取方法
按照RNA提取试剂的说明书进行操作。

六、RT-PCR反应体系的配制
6.1 反转录反应体系的配制
按照反转录试剂盒的说明书进行操作。

6.2 PCR反应体系的配制
按照PCR试剂盒的说明书进行操作。

七、PCR扩增程序
按照PCR试剂盒的说明书进行操作。

八、PCR产物检测和结果判定
8.1 PCR产物检测
将PCR产物进行凝胶电泳检测。

8.2 结果判定
根据PCR产物的大小和凝胶电泳的结果进行判定。

相关标准：
GB/T 6682-2008 分析化学实验室水质规范及评价方法
GB/T 14233.1-2008 检验检疫实验室技术规范 第1部分：一般规定
GB/T 14233.2-2005 检验检疫实验室技术规范 第2部分：生物安全实验室
GB/T 14233.3-2005 检验检疫实验室技术规范 第3部分：动物实验室
GB/T 14233.4-2005 检验检疫实验室技术规范 第4部分：微生物实验室