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禽呼肠孤病毒（ARV）是一种常见的禽类病毒，能够引起禽类呼吸道、消化道疾病，严重影响禽类养殖业的发展。为了及时、准确地检测ARV，保障禽类养殖业的健康发展，本标准制定了反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测禽呼肠孤病毒的技术操作规程。

1.样品采集
样品采集应在病鸟发病后24小时内进行，采集的样品包括病鸟的肺、肝、脾、肾、胸腺等组织，或者是病鸟的血液、粪便、呼吸道分泌物等。采集样品时应注意避免污染，避免样品受到热、冷、干燥等不良影响。

2.RNA提取
RNA提取应在无菌条件下进行，提取方法可以采用商用RNA提取试剂盒或自制试剂盒。提取后的RNA应进行纯化、浓缩、定量和质量检测，确保RNA的完整性和纯度。

3.RT-PCR反应体系的配制
RT-PCR反应体系的配制应根据实验需要进行调整，一般包括反转录酶、PCR引物、PCR酶、dNTPs、MgCl2、模板RNA等。反应体系的配制应在无菌条件下进行，避免污染。

4.PCR扩增条件的设置
PCR扩增条件的设置应根据实验需要进行调整，包括反应温度、反应时间、循环次数等。PCR扩增条件的设置应在无菌条件下进行，避免污染。

5.PCR产物检测和结果判定
PCR产物检测可以采用琼脂糖凝胶电泳、荧光定量PCR、实时荧光定量PCR等方法。结果判定应根据实验需要进行调整，一般包括阳性对照、阴性对照、实验样品等。结果判定应在无菌条件下进行，避免污染。

相关标准：
GB/T 21415-2008 禽呼肠孤病毒检验方法
GB/T 21416-2008 禽呼肠孤病毒疫苗检验方法
GB/T 21417-2008 禽呼肠孤病毒灭活疫苗生产质量控制规范
GB/T 21418-2008 禽呼肠孤病毒灭活疫苗
GB/T 21419-2008 禽呼肠孤病毒灭活疫苗注射液