DB45/T 184-2004
聚合酶链反应检测鸡毒支原体的技术操作规程
发布时间:2004-07-30 实施时间:2004-08-30
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鸡毒支原体是一种常见的家禽病原体,能引起家禽呼吸道疾病和卵巢囊肿等疾病。传统的检测方法包括细胞培养、血清学检测等,但这些方法存在着操作繁琐、时间长、灵敏度低等缺点。聚合酶链反应(PCR)技术因其高灵敏度、高特异性、快速、简便等优点,已成为鸡毒支原体检测的首选方法。
1. 样品采集
样品采集应在病鸡发病后24小时内进行,采集的样品包括鼻拭子、咽拭子、肛拭子、气管分泌物等。采集时应注意避免污染,避免与其他样品混合。
2. 样品提取
样品提取是PCR检测的关键步骤,提取方法的选择直接影响到检测结果的准确性。常用的提取方法包括热处理法、酚-氯仿法、商用提取试剂盒等。提取过程中应注意避免污染,避免与其他样品混合。
3. PCR扩增
PCR扩增是将目标DNA序列扩增至足够数量的过程,常用的PCR扩增方法包括常规PCR、实时荧光定量PCR等。PCR扩增条件的优化对于检测结果的准确性至关重要,应根据实验室的具体情况进行优化。
4. PCR检测
PCR检测是将扩增产物进行检测的过程,常用的检测方法包括琼脂糖凝胶电泳、实时荧光定量PCR等。检测结果的判定应根据实验室的标准进行,同时应进行质量控制,包括阳性对照、阴性对照等。
相关标准:
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