DB45/T 249-2005
聚合酶链反应检测鸡传染性贫血病毒的技术操作规程
发布时间:2005-10-10 实施时间:2005-10-30


鸡传染性贫血病毒是一种由鸡传染性贫血病毒引起的急性、亚急性或慢性传染病,主要通过呼吸道和消化道传播。该病毒对鸡的生产性能和免疫功能造成严重影响,严重时可导致鸡的死亡。因此,对该病毒的检测具有重要意义。

聚合酶链反应是一种高灵敏度、高特异性的核酸检测技术,已广泛应用于病原微生物的检测。本标准规定了PCR检测鸡传染性贫血病毒的技术操作规程,以保证检测结果的准确性和可靠性。

1.样品采集
样品采集应选择病鸡或疑似病鸡,采集血液、组织或粪便等样品。采集血液时,应采用无菌注射器采集心脏血,避免污染。采集组织时,应选择肝、脾、肺等器官,避免污染和损伤。采集粪便时,应选择新鲜粪便,避免污染。

2.核酸提取
核酸提取应选择适当的提取方法,如商用核酸提取试剂盒或手工提取法。提取过程中应注意避免污染和交叉污染。

3.PCR反应体系的配制
PCR反应体系的配制应根据实验室的具体情况进行调整,但必须包括模板DNA、引物、酶、缓冲液和水等组分。引物的设计应根据病毒基因组序列进行,以确保引物的特异性和灵敏度。

4.PCR反应程序
PCR反应程序应根据实验室的具体情况进行调整,但必须包括预变性、变性、退火和延伸等步骤。反应温度和时间应根据引物的特性和PCR反应体系的组成进行调整,以确保PCR反应的特异性和灵敏度。

5.PCR产物检测和结果判定
PCR产物检测应选择适当的方法,如琼脂糖凝胶电泳或实时荧光定量PCR等。结果判定应根据PCR产物的大小和形态进行,以确保结果的准确性和可靠性。

相关标准:
1. GB/T 4789.30-2016 食品微生物学检验 沙门氏菌检验
2. GB/T 4789.4-2016 食品微生物学检验 大肠杆菌检验
3. GB/T 4789.5-2016 食品微生物学检验 菌落总数和酵母菌、霉菌总数的测定
4. GB/T 4789.7-2016 食品微生物学检验 霉菌和酵母菌检验
5. GB/T 4789.10-2016 食品微生物学检验 肠球菌属检验