DB45/T 348-2017
反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测家畜口蹄疫病毒(FMDV)的技术操作规程
发布时间:2006-05-19 实施时间:2006-06-19


一、范围
本标准适用于反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测家畜口蹄疫病毒(FMDV)。

二、引用标准
GB/T 6682 分析化学实验室水质规范及评价方法
GB/T 14233.1-2008 试验动物规范 第1部分:一般要求
GB/T 14233.2-2005 试验动物规范 第2部分:实验动物饲养
GB/T 14233.3-2005 试验动物规范 第3部分:实验动物环境
GB/T 14233.4-2005 试验动物规范 第4部分:实验动物保健

三、术语和定义
3.1 反转录聚合酶链反应(RT-PCR)
一种利用反转录酶将RNA转录成cDNA,再利用聚合酶链反应扩增cDNA的技术。

3.2 RNA提取
将样品中的RNA分离出来的过程。

3.3 阳性对照
已知含有目标基因的样品,用于验证实验的可靠性。

3.4 阴性对照
不含目标基因的样品,用于验证实验的特异性。

四、样品采集
4.1 采集样品应遵循相关规定,避免污染和交叉感染。
4.2 采集样品后应立即送至实验室进行处理。

五、RNA提取
5.1 样品处理前,应将所有操作台面、仪器、试剂等消毒。
5.2 样品处理过程中,应避免RNA的降解和污染。
5.3 RNA提取应使用RNA提取试剂盒,按照说明书操作。
5.4 提取的RNA应立即保存在-80℃以下的冰箱中。

六、RT-PCR反应体系的制备
6.1 RT-PCR反应体系应在无菌条件下制备。
6.2 RT-PCR反应体系的制备应按照试剂盒说明书操作。
6.3 RT-PCR反应体系的制备应包括阳性对照、阴性对照和待测样品。

七、RT-PCR反应程序
7.1 RT-PCR反应程序应按照试剂盒说明书操作。
7.2 RT-PCR反应程序应包括反转录、PCR扩增和结果分析。

八、结果判定
8.1 结果应根据试剂盒说明书进行判定。
8.2 结果应包括阳性对照、阴性对照和待测样品的结果。
8.3 结果应记录在实验记录表中。

相关标准:
GB/T 6682 分析化学实验室水质规范及评价方法
GB/T 14233.1-2008 试验动物规范 第1部分:一般要求
GB/T 14233.2-2005 试验动物规范 第2部分:实验动物饲养
GB/T 14233.3-2005 试验动物规范 第3部分:实验动物环境
GB/T 14233.4-2005 试验动物规范 第4部分:实验动物保健