DB45/ 349-2006
反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测禽脑脊髓炎病毒(AEV)的技术操作规程
发布时间:2006-05-19 实施时间:2006-06-19


禽脑脊髓炎病毒(AEV)是一种常见的禽类病毒,能引起禽类的神经系统疾病。为了及时发现和控制AEV的传播,需要对禽类进行检测。反转录聚合酶链反应(RT-PCR)是一种高灵敏度、高特异性的检测方法,已被广泛应用于AEV的检测。

1.样品采集
样品采集应在病鸟死亡后24小时内进行,采集脑组织和脊髓组织。采集时应注意避免污染和损伤组织。

2.RNA提取
将采集的组织样品放入离心管中,加入适量的RNA提取试剂,按照试剂说明书进行提取。提取后的RNA应立即进行RT-PCR反应。

3.RT-PCR反应体系的配制
将提取的RNA加入RT-PCR反应体系中,反应体系的配制应按照试剂盒说明书进行。反应体系中应包括反转录酶、PCR引物、PCR酶和其他必要的试剂。

4.PCR扩增程序
PCR扩增程序应按照试剂盒说明书进行,包括反转录反应和PCR扩增反应。反转录反应的温度和时间应根据试剂盒说明进行设置,PCR扩增反应的温度和时间也应根据试剂盒说明进行设置。

5.PCR产物检测和结果判定
PCR产物检测可以采用凝胶电泳或其他方法进行。结果判定应根据试剂盒说明书进行,包括阳性对照、阴性对照和实验样品的判定。

相关标准:
1. GB/T 4789.30-2016 食品微生物学检验 沙门氏菌检验
2. GB/T 5009.33-2016 食品中亚硝酸盐的测定
3. GB/T 5009.37-2017 食品中总磷的测定
4. GB/T 5009.39-2016 食品中总氮的测定
5. GB/T 5009.40-2016 食品中硝酸盐的测定