DB45/T 670-2010
聚合酶链反应检测禽I型腺病毒的技术操作规程
发布时间:2010-05-25 实施时间:2010-06-28


禽I型腺病毒是一种常见的禽类病原体,能够引起禽类的呼吸道、消化道和神经系统疾病。为了及时发现和控制禽I型腺病毒的传播,需要对禽类进行检测。聚合酶链反应(PCR)是一种高灵敏度、高特异性的核酸检测技术,已经广泛应用于禽I型腺病毒的检测。本标准规定了PCR检测禽I型腺病毒的技术操作规程,以确保检测结果的准确性和可靠性。

1. 样品采集
样品采集应在禽类发病后的早期进行,采集的样品应包括禽类的呼吸道、消化道和神经系统组织。采集的样品应立即送至实验室进行处理,避免样品的污染和损伤。

2. 核酸提取
核酸提取是PCR检测的关键步骤,应选择适当的核酸提取方法,确保提取的核酸质量和纯度。常用的核酸提取方法包括酚-氯仿法、硅胶柱法和商用核酸提取试剂盒法等。

3. PCR反应体系的配制
PCR反应体系的配制应根据实验需要进行优化,包括引物浓度、模板DNA浓度、酶的浓度和反应缓冲液的配比等。反应体系的配制应严格按照厂家提供的说明书进行,避免反应体系的偏差和不稳定性。

4. PCR反应程序
PCR反应程序应根据实验需要进行优化,包括反应温度、反应时间和循环次数等。常用的PCR反应程序包括常规PCR、实时荧光定量PCR和数字PCR等。反应程序的选择应根据实验需要进行优化,以获得最佳的PCR反应效果。

5. PCR产物检测和结果判定
PCR产物检测应选择适当的方法进行,包括琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳和实时荧光定量PCR等。结果判定应根据实验需要进行优化,包括阈值的设置、阳性对照和阴性对照的选择等。结果判定应根据实验需要进行优化,以获得最佳的PCR检测效果。

相关标准:
1. GB/T 4789.30-2016 食品微生物学检验 沙门氏菌检验
2. GB/T 5009.33-2017 食品中亚硝酸盐的测定
3. GB/T 6682-2008 分析化学实验室水质规范
4. GB/T 22442.1-2008 食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量
5. GB/T 22442.2-2008 食品安全国家标准 食品中兽药最大残留限量