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柑橘衰退病毒是柑橘树的一种病毒性疾病，会导致柑橘树生长缓慢、叶片变黄、果实变小等症状，严重影响柑橘产量和品质。因此，对柑橘衰退病毒的检测十分重要。本标准旨在规范柑橘衰退病毒RT-PCR检测技术，确保检测结果准确可靠。

1.范围
本标准适用于柑橘衰退病毒的RT-PCR检测。

2.样品采集
2.1 样品采集应在病树发病初期采集，采集健康树和病树各一份作为对照。
2.2 样品采集应避免叶片、果实等部位受到损伤。
2.3 采集的样品应立即送至实验室进行处理。

3.RNA提取
3.1 样品处理前，应将工作台、仪器、试剂等消毒处理。
3.2 样品处理应在RNAase-free条件下进行。
3.3 RNA提取应使用RNA提取试剂盒，按照说明书操作。
3.4 提取的RNA应立即进行RT-PCR反应。

4.RT-PCR反应体系
4.1 RT-PCR反应体系应包括：RNA模板、逆转录酶、引物、dNTPs、缓冲液、酶切酶等。
4.2 RT-PCR反应体系的配制应按照说明书操作。
4.3 RT-PCR反应体系的pH值应在7.0-8.5之间。

5.PCR程序
5.1 PCR程序应包括：逆转录反应、PCR扩增反应、终止扩增反应等步骤。
5.2 PCR程序的参数应按照说明书操作。
5.3 PCR程序的反应体系应在RNAase-free条件下进行。

6.结果判定
6.1 PCR扩增产物应经过凝胶电泳检测。
6.2 PCR扩增产物的大小应与预期大小相符。
6.3 PCR扩增产物的序列应与柑橘衰退病毒的序列相符。
6.4 PCR扩增产物的阳性对照和阴性对照应分别呈现预期结果。

相关标准：
GB/T 28001-2011 职业健康安全管理体系规范
GB/T 19001-2016 质量管理体系要求
GB/T 24001-2016 环境管理体系要求及指南
GB/T 28000-2011 食品安全管理体系规范
GB/T 27922-2011 农药残留分析方法