DB45/T 986-2014
柑橘溃疡病菌PCR检测技术规程
发布时间:2014-03-20 实施时间:2014-04-20
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柑橘溃疡病是一种由细菌引起的柑橘病害,严重危害柑橘产业的发展。为了及时、准确地检测柑橘溃疡病菌,保障柑橘产业的健康发展,制定了本标准。
1. 要求
1.1 仪器设备:PCR仪、电泳仪等。
1.2 试剂:PCR试剂盒、DNA提取试剂盒等。
1.3 样品:柑橘叶片、果实等。
1.4 检测环境:无菌操作室或洁净室。
2. 方法
2.1 样品处理
将样品收集后,用无菌水清洗干净,晾干后切成小块,放入离心管中,加入适量的DNA提取试剂,进行DNA提取。
2.2 PCR扩增
将提取的DNA加入PCR试剂盒中,进行PCR扩增。PCR反应条件为:95℃预变性5min,95℃变性30s,55℃退火30s,72℃延伸1min,共35个循环。扩增结束后,进行电泳检测。
2.3 结果判定
根据电泳结果,判断是否存在目标基因片段。存在则为阳性,否则为阴性。
3. 质量控制
3.1 重复性:同一样品在同一实验室内进行3次PCR扩增,结果一致。
3.2 精确度:不同实验室进行PCR扩增,结果一致。
3.3 灵敏度:最低检测限为10pg。
相关标准:
GB/T 4789.3-2016 食品微生物学检验 柑橘溃疡病菌检验
GB/T 6682-2008 分析化学实验室水质规范
GB/T 191-2008 包装通用术语
GB/T 6682-2012 分析化学实验室水质规范
GB/T 191-2016 包装通用术语