DB45/T 1011-2014
鸡新城疫病毒及鸡传染性支气管炎病毒的检测 二重荧光定量反转录聚合酶链反应法
发布时间:2014-05-25 实施时间:2014-06-25
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鸡新城疫病毒和鸡传染性支气管炎病毒是鸡类常见的病原体,对鸡类养殖业造成了很大的经济损失。因此,对这两种病毒的检测非常重要。本标准介绍了一种二重荧光定量反转录聚合酶链反应法,可以快速、准确地检测鸡新城疫病毒和鸡传染性支气管炎病毒。
该方法的原理是利用反转录酶将病毒RNA转录成cDNA,然后进行聚合酶链反应,最后通过荧光信号检测病毒的存在量。该方法具有高灵敏度、高特异性、高重复性和高准确性等优点。
具体操作步骤如下:
1. 样品处理:将样品中的病毒RNA提取出来,并进行纯化和浓缩处理。
2. 反转录:将病毒RNA转录成cDNA,反转录过程中加入内参基因,用于标准化反应体系。
3. 聚合酶链反应:将反转录产生的cDNA与引物和荧光探针一起加入PCR反应体系中,进行PCR扩增。
4. 荧光信号检测:在PCR扩增过程中,荧光探针与PCR产物结合,产生荧光信号。通过检测荧光信号的强度,可以确定病毒的存在量。
本标准还规定了实验室设备和试剂的要求,以及实验室操作的注意事项。同时,还对结果的解释和报告进行了详细说明。
相关标准:
1. GB/T 4789.30-2016 食品微生物学检验 检验方法 第30部分:鸡新城疫病毒检验
2. GB/T 4789.31-2016 食品微生物学检验 检验方法 第31部分:鸡传染性支气管炎病毒检验
3. GB/T 22470-2008 鸡传染性支气管炎病毒灭活疫苗
4. GB/T 22471-2008 鸡新城疫病毒灭活疫苗
5. GB/T 22472-2008 鸡新城疫病毒弱毒疫苗