水罗伞是一种常见的中药材,具有清热解毒、利咽消肿等功效。其中的水黄皮素是一种重要的活性成分,具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种生物活性。因此,对水罗伞药材中水黄皮素的测定具有重要意义。
本标准采用高效液相色谱法进行测定。具体操作步骤如下:
1. 仪器和试剂
(1)高效液相色谱仪:采用反相色谱柱进行分离,检测波长为330nm。
(2)甲醇、乙腈、乙酸、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、水等试剂。
2. 样品制备
取适量水罗伞药材,粉碎后过筛,取粉末0.5g,加入10ml甲醇超声提取30min,离心后取上清液,再加入10ml甲醇超声提取30min,离心后取上清液,将两次上清液合并,用甲醇定容至10ml,过0.22μm滤膜,取滤液1ml,加入10ml甲醇中,即为待测样品。
3. 色谱条件
(1)色谱柱:C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm)。
(2)流动相:甲醇-0.1%磷酸二氢钾水溶液(35:65)。
(3)流速:1.0ml/min。
(4)进样量:20μl。
(5)柱温:25℃。
4. 标准曲线的绘制
取水黄皮素标准品,加入甲醇中制成1mg/ml的标准溶液,再用甲醇稀释得到一系列不同浓度的标准溶液。将标准溶液分别注入色谱仪中进行检测,绘制出标准曲线。
5. 样品的检测
将待测样品注入色谱仪中进行检测,根据标准曲线计算出水黄皮素的含量。
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