宽体金线蛭是一种常见的中药材,具有清热解毒、消肿止痛等功效。其中氨基酸是宽体金线蛭中的重要成分之一,对其质量的评价具有重要意义。因此,本标准制定了宽体金线蛭中氨基酸含量的测定方法,以保证其质量的稳定性和可靠性。
1.范围
本标准适用于宽体金线蛭中氨基酸含量的测定。
2.仪器和试剂
2.1 仪器
高效液相色谱仪、色谱柱、分光光度检测器、注射器、移液器、pH计等。
2.2 试剂
甲醇、乙腈、乙酸、氯化铵、氯化钠、三乙胺、氢氧化钠、硫酸等。
3.样品的制备
将宽体金线蛭粉末样品称取0.5g,加入10mL的0.1mol/L氢氧化钠溶液中,振荡混合30min,加入10mL的甲醇,振荡混合10min,离心10min,取上清液过滤,取滤液10mL,加入0.1mol/L的氯化铵溶液调节pH至8.5,加入0.1mol/L的氯化钠溶液调节离子强度,最终体积调节至25mL。
4.操作步骤
4.1 色谱条件
色谱柱:C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm)
流动相:甲醇-乙腈-0.05mol/L乙酸溶液(15:15:70)
流速:1.0mL/min
检测波长:338nm
柱温:25℃
进样量:20μL
4.2 样品的测定
将样品注入高效液相色谱仪中,按照色谱条件进行分离,记录各氨基酸的峰面积,计算出各氨基酸的含量。
5.计算
5.1 氨基酸的含量计算公式
C(μg/mL)=A/ε
其中,C为氨基酸的浓度,μg/mL;
A为氨基酸的峰面积;
ε为氨基酸的摩尔吸光系数,μg/mL。
5.2 氨基酸的含量计算
氨基酸含量(mg/g)=C×V/m
其中,C为氨基酸的浓度,μg/mL;
V为样品的体积,mL;
m为样品的质量,g。
相关标准
GB/T 5009.124-2003 食品中氨基酸的测定 高效液相色谱法
GB/T 20394-2006 中药材 氨基酸含量的测定
GB/T 20395-2006 中药材 氨基酸组成的测定
GB/T 20396-2006 中药材 氨基酸比值的测定
GB/T 20397-2006 中药材 氨基酸序列的测定