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甘蔗黑穗病是由黑穗病菌引起的一种重要的甘蔗病害，其主要危害是导致甘蔗减产和品质下降。为了及时、准确地鉴定甘蔗黑穗病，保障甘蔗生产的健康发展，本标准制定了PCR法鉴定甘蔗黑穗病的方法。

1.样品采集
样品采集应选择病情明显的甘蔗叶片或茎段，避免采集受到其他病害或损伤的组织。采集后应立即送至实验室进行处理。

2.DNA提取
样品处理前应先将其表面消毒，然后取适量样品进行粉碎和提取DNA。DNA提取方法可以采用商用DNA提取试剂盒或自制试剂盒，提取后的DNA应保存在-20℃以下。

3.PCR反应体系
PCR反应体系包括PCR反应缓冲液、酶、引物和模板DNA。具体反应体系如下：

PCR反应缓冲液 10μL
酶 0.5μL
引物 1μL
模板DNA 1μL
去离子水 7.5μL

4.PCR程序
PCR程序如下：

预变性 95℃ 5min
变性 95℃ 30s
退火 55℃ 30s
延伸 72℃ 30s
循环 35次
最终延伸 72℃ 10min
保存 4℃

5.结果判定
PCR反应结束后，将反应产物进行电泳分析，根据PCR产物的大小和带型判断是否存在甘蔗黑穗病。如果PCR产物大小为约400bp的带型，则判定为阳性；否则判定为阴性。

相关标准：
GB/T 23457-2009 甘蔗种质资源分类和鉴定方法
GB/T 23458-2009 甘蔗病害分类和鉴定方法
GB/T 23459-2009 甘蔗品种鉴定方法
GB/T 23460-2009 甘蔗生长期观测和调查方法
GB/T 23461-2009 甘蔗产量测定方法