DB45/T 2353-2021
猪主要病毒性腹泻鉴别检测 多重反转录聚合酶链反应法
发布时间:2021-07-27 实施时间:2021-08-31


猪病毒性腹泻是一种常见的猪病,由多种病毒引起,严重影响了猪的生产和养殖。为了及时、准确地诊断猪病毒性腹泻,保障猪的健康和养殖业的发展,制定了《猪主要病毒性腹泻鉴别检测 多重反转录聚合酶链反应法》标准。

该标准规定了猪主要病毒性腹泻鉴别检测的多重反转录聚合酶链反应法(RT-PCR)的技术要求、试剂盒的要求、操作规范、结果判定及报告等内容。具体要求如下:

1.技术要求
(1)RT-PCR反应体系应包括反转录酶、热稳定DNA聚合酶、引物、探针等。
(2)反应体系应能够同时检测猪病毒性腹泻病毒(TGEV、PEDV、PDCoV)和非病毒性腹泻病原体(E. coli、Rotavirus、Transmissible gastroenteritis virus)。
(3)反应体系应具有高灵敏度和特异性,能够检测到10个拷贝数的病毒RNA。

2.试剂盒的要求
(1)试剂盒应包括反转录酶、热稳定DNA聚合酶、引物、探针等。
(2)试剂盒应具有高灵敏度和特异性,能够检测到10个拷贝数的病毒RNA。
(3)试剂盒应具有稳定性,能够在常温下保存至少6个月。

3.操作规范
(1)操作人员应具有相关的实验室技能和操作经验。
(2)操作应在无菌条件下进行,避免污染。
(3)反应体系的配制和反应条件应按照试剂盒说明书进行。
(4)反应后的产物应进行凝胶电泳检测,确认目标基因的特异性扩增。

4.结果判定及报告
(1)结果应根据试剂盒说明书进行判定。
(2)结果应记录在实验记录本中,并进行签名和日期确认。
(3)结果应及时报告给相关部门和人员。

相关标准:
GB/T 22470-2008 猪病毒性腹泻病原学检测方法
GB/T 22471-2008 猪病毒性腹泻病原学检测质量控制
GB/T 22472-2008 猪病毒性腹泻病原学检测结果判定
GB/T 22473-2008 猪病毒性腹泻病原学检测报告
GB/T 22474-2008 猪病毒性腹泻病原学检测数据管理