香蕉是我国重要的经济作物之一，但香蕉种苗枯萎病是香蕉生产中的一大难题。为了保障香蕉生产的健康发展，需要对香蕉种苗进行枯萎病菌的检测和鉴定。本标准就是为了规范香蕉种苗枯萎病菌分子检测与鉴定技术而制定的。

1.范围
本标准适用于香蕉种苗枯萎病菌的分子检测和鉴定。

2.术语和定义
2.1 香蕉种苗：指香蕉繁殖材料，包括离体培养苗、组培苗、扦插苗等。
2.2 枯萎病菌：指引起香蕉种苗枯萎病的真菌，主要包括枯萎病菌属（Fusarium spp.）和镰刀菌属（Nectria spp.）。
2.3 分子检测：指利用分子生物学技术对目标物质进行检测的方法。
2.4 鉴定：指通过对检测结果进行分析和比对，确定目标物质的种属和亚种。

3.样品采集
3.1 样品选择：选择疑似感染枯萎病菌的香蕉种苗作为检测样品。
3.2 样品采集：采用无菌操作方法，将样品从根部、茎部、叶片等部位采集，每个部位采集3-5个样品，合并成1个样品，放入无菌袋中，标明采样时间、采样地点、采样人员等信息。

4. DNA提取
4.1 样品处理：将采集的样品在-80℃冷冻保存，取出后在无菌条件下，将样品切碎并加入提取液中，进行震荡和离心等操作，最终得到DNA提取物。
4.2 DNA质量检测：采用紫外分光光度计检测DNA的纯度和浓度，确保DNA质量符合要求。

5. PCR扩增
5.1 PCR反应体系：根据实验需要，配置PCR反应体系，包括模板DNA、引物、酶、缓冲液等。
5.2 PCR扩增条件：根据引物序列和实验需要，确定PCR扩增条件，包括温度、时间、循环次数等。
5.3 PCR产物检测：采用琼脂糖凝胶电泳等方法对PCR产物进行检测，确定扩增产物的大小和数量。

6. 电泳分析
6.1 样品处理：将PCR产物加入琼脂糖凝胶中，进行电泳分析。
6.2 电泳条件：根据琼脂糖凝胶的类型和实验需要，确定电泳条件，包括电压、时间等。
6.3 结果分析：根据电泳图谱，确定扩增产物的大小和数量，判断样品是否存在枯萎病菌。

7. 序列分析
7.1 PCR产物纯化：将PCR产物进行纯化，得到纯净的PCR产物。
7.2 测序反应：将PCR产物进行测序反应，得到序列数据。
7.3 序列分析：根据序列数据，进行序列比对和分析，确定样品中枯萎病菌的种属和亚种。

相关标准
GB/T 28001-2011 质量管理体系
GB/T 28004-2011 环境管理体系
GB/T 28011-2011 职业健康安全管理体系
GB/T 28013-2011 信息安全管理体系
GB/T 28014-2011 供应链安全管理体系