高致病性猪繁殖与呼吸综合症病毒（PRRSV）是一种严重危害猪健康的病毒，其感染会导致猪的生长发育受到影响，甚至会导致猪的死亡。因此，对PRRSV的检测具有重要的意义。本标准规定了一种可靠的PRRSV检测方法，即RT-PCR检测方法。

1. 试剂和设备
1.1 试剂
1.1.1 RNA提取试剂盒
1.1.2 RT-PCR试剂盒
1.1.3 PRRSV特异性引物和探针
1.1.4 蒸馏水
1.2 设备
1.2.1 离心机
1.2.2 PCR仪
1.2.3 生物安全柜
1.2.4 超净工作台
1.2.5 紫外线灯

2. 样品处理
2.1 血清样品
2.1.1 取2ml血清样品，离心10min，将上清液转移到新离心管中。
2.1.2 加入2mlRNA提取试剂，混匀，离心10min，将上清液转移到新离心管中。
2.1.3 加入2ml乙醇，混匀，离心5min，将上清液转移到新离心管中。
2.1.4 加入1ml洗涤缓冲液，混匀，离心5min，将上清液转移到新离心管中。
2.1.5 加入1ml洗涤缓冲液，混匀，离心5min，将上清液转移到新离心管中。
2.1.6 加入50μl蒸馏水，混匀，离心5min，将上清液转移到新离心管中。
2.2 组织样品
2.2.1 取适量组织样品，加入2mlRNA提取试剂，切碎，离心10min，将上清液转移到新离心管中。
2.2.2 加入2ml乙醇，混匀，离心5min，将上清液转移到新离心管中。
2.2.3 加入1ml洗涤缓冲液，混匀，离心5min，将上清液转移到新离心管中。
2.2.4 加入1ml洗涤缓冲液，混匀，离心5min，将上清液转移到新离心管中。
2.2.5 加入50μl蒸馏水，混匀，离心5min，将上清液转移到新离心管中。
2.3 其他样品
按照相应的方法进行处理。

3. RT-PCR检测
3.1 取RNA提取液1μl，加入RT-PCR试剂盒中，进行反转录反应。
3.2 取反转录产物1μl，加入PCR试剂盒中，进行PCR扩增反应。
3.3 扩增产物进行凝胶电泳，观察PCR产物带型。

4. 结果判定
4.1 通过PCR扩增反应得到明显的PCR产物带型，且大小符合预期，判定为阳性。
4.2 未得到PCR产物带型，判定为阴性。

相关标准
GB/T 22470-2008 猪繁殖与呼吸综合症病毒抗体检测方法
GB/T 22471-2008 猪繁殖与呼吸综合症病毒抗原检测方法
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