中华鳖是一种重要的水生经济动物,但由于其生长环境复杂,易受到各种病原体的侵袭,其中出血性肠炎病是一种常见的疾病。为了保障中华鳖的健康和养殖业的可持续发展,本标准制定了中华鳖出血性肠炎病的检疫技术规程。
1. 病原学检测
病原学检测是中华鳖出血性肠炎病检疫的基础,本标准要求采用PCR技术进行检测。具体操作方法包括样品采集、DNA提取、PCR扩增等步骤。样品采集应选择病死中华鳖的肠道、肝脏、脾脏等组织,或者是病中华鳖的粪便、肠道内容物等。DNA提取应使用商用DNA提取试剂盒,按照说明书进行操作。PCR扩增应选择适当的引物和探针,按照标准程序进行扩增。
2. 病原学鉴定
病原学鉴定是判断中华鳖是否感染出血性肠炎病的关键步骤,本标准要求采用序列比对和生物信息学分析进行鉴定。具体操作方法包括PCR产物测序、序列比对、系统发育分析等步骤。PCR产物测序应选择PCR扩增产物进行,使用商用测序服务机构进行测序。序列比对应选择适当的软件进行,比对结果应与已知的出血性肠炎病病原体序列进行比对。系统发育分析应使用适当的软件进行,构建系统发育树,判断中华鳖感染的出血性肠炎病病原体与已知的病原体的亲缘关系。
3. 病原学检测方法
病原学检测方法是指PCR技术的操作方法,本标准要求PCR扩增反应体系包括模板DNA、引物、探针、酶、缓冲液等。PCR扩增反应条件包括温度、时间、循环次数等。具体操作方法应按照PCR试剂盒说明书进行。
4. 病原学鉴定方法
病原学鉴定方法是指序列比对和生物信息学分析的操作方法,本标准要求序列比对应选择适当的软件进行,比对结果应与已知的出血性肠炎病病原体序列进行比对。系统发育分析应使用适当的软件进行,构建系统发育树,判断中华鳖感染的出血性肠炎病病原体与已知的病原体的亲缘关系。
5. 病原学检测结果判定
病原学检测结果判定是指根据PCR扩增产物的特征和序列比对结果,判断中华鳖是否感染出血性肠炎病的操作方法。本标准要求PCR扩增产物应具有明显的特征带,序列比对结果应与已知的出血性肠炎病病原体序列具有高度一致性。
相关标准
GB/T 14917-2009 水生动物病原学检验通则
GB/T 14918-2009 水生动物病原学检验方法
GB/T 14919-2009 水生动物病原学检验结果判定
GB/T 14920-2009 水生动物病原学检验报告编制
GB/T 14921-2009 水生动物病原学检验质量控制