辣椒是我国重要的经济作物之一，其品种繁多，品种纯度鉴定对于辣椒的种质资源保护和品种推广具有重要意义。传统的品种鉴定方法主要依靠形态学特征和生物学特性，但这些方法存在着主观性、受环境影响大等缺点。随着分子生物学技术的发展，利用分子标记技术进行品种鉴定已成为一种快速、准确、可靠的方法。

本标准采用SSR分子标记法进行辣椒品种纯度鉴定。SSR（Simple Sequence Repeat）是一种广泛存在于基因组中的DNA序列，其长度通常在1-6个碱基对之间，具有多态性和稳定性等特点，是进行品种鉴定的理想分子标记。该方法的具体步骤如下：

1. 样品的采集：从辣椒植株的嫩叶中采集约0.5g的组织样品，放入2mL离心管中，加入1mL CTAB提取液，混匀后放入65℃水浴中孵育30min。

2. DNA的提取：将孵育后的样品离心，取上清液加入等体积的氯仿-异丙醇（24:1）混合液，混匀后离心，取上清液加入等体积的冷乙醇，混匀后放置-20℃冷冻箱中沉淀DNA，离心后去除上清液，加入70%的乙醇洗涤，离心后去除上清液，将沉淀干燥后加入TE缓冲液中溶解。

3. PCR扩增：根据所选用的SSR引物对，设计PCR反应体系，进行PCR扩增。PCR反应体系包括模板DNA、引物、dNTPs、Taq酶和缓冲液等，反应条件为：94℃预变性5min，94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，共35个循环，72℃延伸10min。

4. 电泳分离：将PCR产物进行电泳分离，根据分离结果进行数据分析。

5. 数据分析：根据PCR产物的大小和数量，进行数据分析，判断样品的品种纯度。

相关标准
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