禽流感病毒是一种高致病性病毒,对禽类造成严重危害。为了及时发现和控制禽流感病毒的传播,需要对禽类进行检测。本标准提供了一种乳胶凝集检测方法,用于检测禽流感病毒。
1. 范围
本标准适用于禽流感病毒的乳胶凝集检测。
2. 原理
本方法利用禽流感病毒抗原与抗体在乳胶凝集试剂中的特异性反应,形成凝集反应,从而检测禽流感病毒。
3. 试剂和仪器
3.1 试剂
(1)禽流感病毒抗原乳胶凝集试剂
(2)禽流感病毒抗体乳胶凝集试剂
(3)生理盐水
(4)禽流感病毒阳性对照血清
(5)禽流感病毒阴性对照血清
3.2 仪器
(1)离心机
(2)显微镜
4. 操作步骤
4.1 样品处理
(1)取禽类血清样品,离心去除杂质。
(2)将样品稀释至1:2,1:4,1:8,1:16,1:32,1:64,1:128,1:256,1:512,1:1024,分别标记为A,B,C,D,E,F,G,H,I,J。
4.2 试剂配制
(1)将禽流感病毒抗原乳胶凝集试剂和禽流感病毒抗体乳胶凝集试剂分别加入生理盐水中,制成1:2的悬液。
(2)将禽流感病毒阳性对照血清和禽流感病毒阴性对照血清分别稀释至1:2,标记为阳性对照血清和阴性对照血清。
4.3 试验操作
(1)取10μl禽流感病毒抗原乳胶凝集试剂悬液,加入96孔板的A、B、C、D、E、F、G、H孔中。
(2)取10μl禽流感病毒抗体乳胶凝集试剂悬液,加入96孔板的A、B、C、D、E、F、G、H孔中。
(3)取10μl生理盐水,加入96孔板的I、J孔中。
(4)取10μl禽流感病毒阳性对照血清,加入96孔板的A孔中。
(5)取10μl禽流感病毒阴性对照血清,加入96孔板的J孔中。
(6)取10μl样品稀释液,加入96孔板的B、C、D、E、F、G、H孔中。
(7)轻轻振荡96孔板,使试剂充分混合。
(8)在37℃恒温箱中孵育30分钟。
(9)观察96孔板,记录凝集反应情况。
5. 结果判定
(1)阳性对照血清在A孔出现凝集反应,阴性对照血清在J孔未出现凝集反应,否则试验无效。
(2)样品凝集反应与阳性对照血清凝集反应相同或更弱,判定为阳性。
(3)样品凝集反应与阳性对照血清凝集反应不同或更强,判定为阴性。
6. 结果报告
(1)样品凝集反应与阳性对照血清凝集反应相同或更弱,报告为阳性。
(2)样品凝集反应与阳性对照血清凝集反应不同或更强,报告为阴性。
相关标准
GB/T 22470-2008 禽流感病毒检测方法
GB/T 22471-2008 禽流感病毒灭活疫苗检测方法
GB/T 22472-2008 禽流感病毒灭活疫苗疫效测定方法
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GB/T 22474-2008 禽流感病毒灭活疫苗生产质量控制规范