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饲料中的黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、赭曲毒霉素A和桔毒素是常见的饲料中的真菌毒素，对动物的健康和生产性能有很大的影响。因此，对饲料中这些真菌毒素的检测非常重要。本标准采用高效液相色谱法对饲料中的这些真菌毒素进行检测。

1. 范围
本标准适用于饲料中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、赭曲毒霉素A和桔毒素的测定。

2. 仪器和试剂
2.1 高效液相色谱仪
2.2 色谱柱：C18色谱柱
2.3 称量仪
2.4 离心机
2.5 超声波清洗仪
2.6 甲醇、乙腈、水、乙酸、乙酸乙酯、氯仿、正己烷等试剂

3. 样品的制备
3.1 取样：按照GB/T 6682的规定进行取样。
3.2 样品的制备：将样品粉碎并筛选，取1g样品加入50mL甲醇中，超声波清洗10min，离心10min，取上清液过滤，取10mL上清液加入10mL水中，加入10mL氯仿，振荡5min，离心10min，取上清液过滤，取5mL上清液加入5mL正己烷中，振荡5min，离心10min，取上清液过滤，取2mL上清液加入2mL乙酸乙酯中，振荡5min，离心10min，取上清液过滤，即为待测样品。

4. 检测方法
4.1 色谱条件
色谱柱：C18色谱柱
流动相：甲醇-水（含0.1%乙酸）（70:30）
流速：1.0mL/min
检测波长：黄曲霉毒素B1和赭曲毒霉素A为365nm，玉米赤霉烯酮和桔毒素为254nm
进样量：10μL

4.2 标准曲线的制备
取黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、赭曲毒霉素A和桔毒素的标准品，分别加入甲醇中制备成1mg/mL的标准溶液。取不同浓度的标准溶液，分别加入甲醇中制备成不同浓度的标准曲线。将标准曲线的峰面积与浓度制成标准曲线。

4.3 样品的检测
将制备好的样品加入色谱柱中进行检测，根据标准曲线计算出样品中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、赭曲毒霉素A和桔毒素的含量。

5. 结果的计算
样品中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、赭曲毒霉素A和桔毒素的含量，根据标准曲线计算出来。

6. 精密度和准确度
6.1 精密度：在同一天内，对同一样品进行6次测定，计算相对标准偏差（RSD），RSD不应大于10%。
6.2 准确度：在同一天内，对同一样品进行6次测定，计算平均值，与标准值进行比较，误差不应大于10%。

相关标准：
GB/T 6682-2008 饲料中真菌毒素的检验方法
GB/T 18979-2003 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 高效液相色谱法
GB/T 23533-2009 饲料中玉米赤霉烯酮的测定 高效液相色谱法
GB/T 23534-2009 饲料中赭曲毒霉素A的测定 高效液相色谱法
GB/T 23535-2009 饲料中桔毒素的测定 高效液相色谱法