饲料中添加牛、羊源性成分是为了提高饲料的营养价值,但如果添加过量或者添加不当,会对动物的健康产生不良影响。因此,对饲料中的牛、羊源性成分进行检测是非常必要的。本标准提供了一种可靠的PCR检测方法,可以对饲料中的牛、羊源性成分进行定性检测。
1. 检测原理
本标准采用PCR技术进行检测。PCR技术是一种基于DNA扩增的技术,可以在短时间内扩增出目标DNA序列,从而实现对目标物质的检测。本标准采用特异性引物,可以扩增出牛、羊的特异性DNA序列,从而实现对饲料中牛、羊源性成分的定性检测。
2. 样品处理
将饲料样品取1g,加入10ml的PBS缓冲液中,混匀后离心,弃去上清液,重复上述步骤2次,最后将沉淀物用PBS缓冲液洗涤1次,离心后弃去上清液,留下沉淀物。
3. DNA提取
将沉淀物加入500μl的DNA提取试剂中,混匀后离心,将上清液转移到新的离心管中,加入500μl的异丙醇,混匀后离心,将上清液转移到新的离心管中,加入500μl的洗涤缓冲液,混匀后离心,将上清液转移到新的离心管中,加入500μl的70%乙醇,混匀后离心,将上清液转移到新的离心管中,干燥后加入50μl的去离子水,混匀后离心,得到DNA提取物。
4. PCR扩增
将DNA提取物加入PCR反应管中,加入特异性引物和PCR试剂,进行PCR扩增。PCR反应条件为:95℃预变性5min,95℃变性30s,55℃退火30s,72℃延伸30s,共35个循环,最后72℃延伸5min。扩增产物进行凝胶电泳,观察扩增产物的大小和形态,判断是否存在牛、羊源性成分。
5. 结果判定
如果PCR扩增产物大小和形态与牛、羊的特异性DNA序列相符,则判定样品中存在牛、羊源性成分;如果PCR扩增产物大小和形态与牛、羊的特异性DNA序列不相符,则判定样品中不存在牛、羊源性成分。
相关标准
1. GB/T 23200-2008 饲料中动物源性成分的检验
2. GB/T 23201-2008 饲料中植物源性成分的检验
3. GB/T 23202-2008 饲料中微生物污染的检验
4. GB/T 23203-2008 饲料中添加剂的检验
5. GB/T 23204-2008 饲料中营养成分的检验