仔猪肠毒素性大肠杆菌（ETEC）是一种常见的猪肠道病原菌，可引起仔猪腹泻等疾病。反向间接血凝试验是一种常用的检测ETEC抗体的方法，本标准旨在规范该试验的操作流程，提高检测结果的准确性和可靠性。

试验原理
反向间接血凝试验是一种间接免疫荧光法，利用ETEC菌株的O抗原与抗体结合，形成抗原-抗体复合物，再与荧光素化的抗猪IgG结合，形成荧光素-抗原-抗体-荧光素复合物，通过荧光显微镜观察荧光素的荧光强度，判断样品中ETEC抗体的含量。

试剂和设备
- ETEC菌株
- 抗猪IgG荧光素化试剂
- PBS缓冲液
- 96孔微孔板
- 荧光显微镜

试验步骤
1. 准备样品：将待测血清稀释至1:100，取100μL加入96孔微孔板中。
2. 加入ETEC菌株：取100μL含有ETEC菌株的PBS缓冲液加入96孔微孔板中，与样品混合。
3. 孵育：在37℃下孵育1小时。
4. 洗涤：用PBS缓冲液洗涤3次，每次洗涤200μL。
5. 加入抗猪IgG荧光素化试剂：取100μL抗猪IgG荧光素化试剂加入96孔微孔板中，孵育30分钟。
6. 洗涤：用PBS缓冲液洗涤3次，每次洗涤200μL。
7. 荧光显微镜观察：在荧光显微镜下观察96孔微孔板中的荧光强度，判断样品中ETEC抗体的含量。

结果判定
- 荧光强度≥2：阳性
- 荧光强度＜2：阴性

相关标准
- GB/T 4789.30-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠杆菌检验
- GB/T 31604.49-2016 食品安全国家标准 食品添加剂 酸度调节剂
- GB/T 31604.50-2016 食品安全国家标准 食品添加剂 稳定剂
- GB/T 31604.51-2016 食品安全国家标准 食品添加剂 膨松剂
- GB/T 31604.52-2016 食品安全国家标准 食品添加剂 着色剂