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羟脯氨酸是一种重要的氨基酸，对人体健康有很大的作用。水产品中羟脯氨酸含量的测定对于保障人们的健康具有重要意义。本标准采用高效液相色谱法测定水产品中羟脯氨酸含量，具有准确、快速、简便等特点。

1. 原理
样品经过蛋白水解后，羟脯氨酸与荧光素异硫氰酸酯（OPA）反应生成荧光衍生物，荧光强度与羟脯氨酸的浓度成正比关系。通过高效液相色谱法分离荧光衍生物，测定荧光强度，计算出羟脯氨酸的含量。

2. 仪器和设备
（1）高效液相色谱仪
（2）荧光检测器
（3）自动进样器
（4）恒温水浴器
（5）超声波清洗器

3. 试剂和材料
（1）荧光素异硫氰酸酯（OPA）
（2）甲醇
（3）乙腈
（4）磷酸盐缓冲液
（5）水产品样品

4. 操作步骤
（1）样品制备：取适量样品，加入适量磷酸盐缓冲液，超声波清洗10分钟，离心10分钟，取上清液备用。
（2）样品水解：取适量上清液，加入适量6mol/L HCl，恒温水浴加热2小时，冷却至室温，加入适量氢氧化钠溶液调节pH值至7.0-7.5。
（3）荧光衍生化：取适量水解液，加入适量OPA溶液，混匀后放置室温下反应15分钟。
（4）高效液相色谱分析：将荧光衍生物注入高效液相色谱仪，采用C18柱分离，甲醇-乙腈-磷酸盐缓冲液为流动相，荧光检测器检测，计算出羟脯氨酸的含量。

5. 结果计算
羟脯氨酸的含量计算公式为：C=K×F÷V，其中C为羟脯氨酸的含量，K为标准曲线斜率，F为荧光强度，V为样品体积。

相关标准：
GB 5009.228-2016 食品中氨基酸的测定
GB/T 5009.124-2003 鱼及鱼制品中总氨基酸的测定
GB/T 5009.229-2016 食品中谷氨酸钠的测定
GB/T 5009.230-2016 食品中精氨酸的测定
GB/T 5009.231-2016 食品中天冬氨酸的测定