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猪流行性腹泻病毒是一种常见的猪病毒，能引起猪的急性肠炎，严重影响猪的生长发育和经济效益。为了及时发现和控制猪流行性腹泻病毒的传播，需要对其进行分离和检测。本标准旨在规范猪流行性腹泻病毒分离与RT-PCR检测技术的要求、方法和步骤，以保证检测结果的准确性和可靠性。

1. 范围
本标准适用于猪流行性腹泻病毒的分离和RT-PCR检测。

2. 术语和定义
2.1 猪流行性腹泻病毒
猪流行性腹泻病毒是一种RNA病毒，属于科学家家族，能引起猪的急性肠炎。

2.2 分离
从样品中分离出病毒，使其在细胞培养物中增殖。

2.3 RT-PCR检测
利用逆转录酶将RNA转录成cDNA，再利用聚合酶链式反应（PCR）扩增cDNA，检测病毒核酸。

3. 要求
3.1 样品采集
样品应采集自疑似感染猪的肠道、粪便、血液等，采集后应立即送检。

3.2 实验室条件
实验室应具备符合生物安全要求的条件，实验人员应具备相关的技术和操作经验。

3.3 试剂和设备
试剂和设备应符合相关标准和规定，使用前应检查其有效期和质量。

4. 方法和步骤
4.1 病毒分离
4.1.1 样品处理
将样品加入细胞培养物中，培养一定时间后观察细胞是否出现病变，如出现病变则进行下一步操作。

4.1.2 病毒纯化
将病毒分离出来，进行纯化处理，得到纯净的病毒。

4.2 RT-PCR检测
4.2.1 样品提取
将样品中的病毒核酸提取出来，得到纯净的核酸。

4.2.2 RT-PCR扩增
将提取出来的核酸进行逆转录和PCR扩增，得到扩增产物。

4.2.3 电泳检测
将扩增产物进行电泳检测，观察是否出现目标条带。

5. 结果判定
根据电泳结果判定样品是否为猪流行性腹泻病毒阳性或阴性。

相关标准：
GB/T 22470-2008 猪流行性腹泻病毒抗体检测方法
GB/T 22471-2008 猪流行性腹泻病毒灭活疫苗
GB/T 22472-2008 猪流行性腹泻病毒活疫苗
GB/T 22473-2008 猪流行性腹泻病毒核酸检测方法
GB/T 22474-2008 猪流行性腹泻病毒分子流行病学检测方法