DB37/T 3319-2018
水貂、狐和貉犬瘟热病毒等10种病毒性病原实时荧光PCR检测方法
发布时间:2018-06-12 实施时间:2018-07-12


实时荧光PCR技术是一种高灵敏度、高特异性、高通量的分子生物学检测技术,已广泛应用于病原微生物的检测和诊断。水貂、狐和貉犬瘟热病毒等10种病毒性病原实时荧光PCR检测方法是一项重要的检测技术,对于疫情的监测和防控具有重要意义。

该标准规定了水貂、狐和貉犬瘟热病毒等10种病毒性病原实时荧光PCR检测方法的技术要求、试剂盒的组成、试剂盒的性能指标、试剂盒的使用说明、实验操作步骤、结果判定及质量控制等内容。

技术要求:
1. 实时荧光PCR仪的灵敏度应不低于100拷贝/μL;
2. 试剂盒应具有良好的特异性和灵敏度;
3. 试剂盒应具有良好的重复性和稳定性;
4. 试剂盒应具有良好的批间和批内一致性。

试剂盒的组成:
1. PCR反应体系;
2. 荧光探针;
3. 内标;
4. 正对照品;
5. 负对照品;
6. 模板DNA提取试剂盒。

试剂盒的性能指标:
1. 特异性:能够特异性检测水貂瘟热病毒、狐瘟热病毒、貉犬瘟热病毒等10种病毒性病原;
2. 灵敏度:能够检测到100拷贝/μL的病毒DNA;
3. 重复性:同一实验室内,同一实验者、同一设备、同一试剂盒、同一样品,重复检测10次,阳性检出率应不低于95%;
4. 稳定性:试剂盒应在规定的保存条件下,能够保持稳定性;
5. 批间和批内一致性:同一实验室内,不同批次的试剂盒,重复检测10次,阳性检出率应不低于95%。

试剂盒的使用说明:
1. 样品的采集、保存和运输;
2. DNA的提取和纯化;
3. PCR反应条件;
4. 荧光信号检测和数据分析。

实验操作步骤:
1. 样品的采集、保存和运输;
2. DNA的提取和纯化;
3. PCR反应条件;
4. 荧光信号检测和数据分析。

结果判定:
1. 根据荧光信号的阈值周期数(Ct值)判断样品是否为阳性;
2. 根据阳性样品的Ct值大小,判断病毒载量的高低。

质量控制:
1. 内标的引入和检测;
2. 正对照品和负对照品的引入和检测;
3. 实验室质量控制。

相关标准:
1. GB/T 21415-2008 水貂瘟热病毒检测方法
2. GB/T 21416-2008 狐瘟热病毒检测方法
3. GB/T 21417-2008 貉犬瘟热病毒检测方法
4. DB37/T 3318-2018 犬瘟热病毒等7种病毒性病原实时荧光PCR检测方法
5. DB37/T 3317-2018 猪瘟病毒等10种病毒性病原实时荧光PCR检测方法