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水貂、狐和貉是常见的毛皮动物,其毛皮具有很高的经济价值。然而,这些动物也是一些细菌的潜在宿主,如布鲁氏菌、沙门氏菌、立克次体等,这些细菌不仅会危害动物的健康,还会对人类造成潜在的威胁。因此,对这些动物进行细菌检测具有重要的意义。
实时荧光PCR技术是一种高灵敏度、高特异性的分子生物学检测方法,已广泛应用于细菌、病毒等微生物的检测。本标准针对水貂、狐和貉等动物的细菌检测,制定了实时荧光PCR检测方法。
具体步骤如下:
1. 样品处理:将样品(如血液、组织等)收集到无菌离心管中,离心10分钟,取上清液备用。
2. DNA提取:采用商用DNA提取试剂盒进行DNA提取,按照试剂盒说明书进行操作。
3. PCR扩增:将提取的DNA加入PCR反应体系中,进行PCR扩增。PCR反应体系包括PCR Master Mix、引物、探针、DNA模板等,具体反应条件如下:
预变性:95℃,5分钟
变性:95℃,10秒
退火:60℃,30秒
扩增:72℃,30秒
循环40次
4. 实时荧光检测:在PCR扩增过程中,实时监测PCR产物的荧光信号,根据荧光信号的变化判断是否存在目标细菌。
本标准还对实验室环境、试剂、仪器等方面进行了要求,以确保检测结果的准确性和可靠性。
相关标准:
1. GB/T 4789.33-2016 食品微生物学检验 沙门氏菌检验
2. GB/T 4789.34-2016 食品微生物学检验 布鲁氏菌检验
3. GB/T 4789.35-2016 食品微生物学检验 立克次体检验
4. DB37/T 3319-2018 水貂、狐和貉常见病毒实时荧光PCR检测方法
5. DB37/T 3321-2018 水貂、狐和貉常见寄生虫实时荧光PCR检测方法