DB35/T 1021-2010
食用菌品种鉴别技术规范-DNA指纹法
发布时间:2010-06-07 实施时间:2010-07-08
DNA指纹法是一种基于DNA序列差异的分子生物学技术,可以用于食用菌品种鉴别。本标准规定了DNA指纹法的技术要求和操作规范,包括样品采集、DNA提取、PCR扩增、电泳分离、图谱分析等步骤。
1. 样品采集
样品应选取新鲜、完整、无病虫害的菌体,避免受到环境污染和其他菌种的干扰。采集后应立即进行DNA提取。
2. DNA提取
DNA提取应采用适当的方法,如CTAB法、酚/氯仿法等。提取的DNA应具有高纯度、高质量、高浓度等特点,以保证后续PCR扩增的成功率和准确性。
3. PCR扩增
PCR扩增应选择适当的引物,如ITS、SSR等,以保证扩增的特异性和灵敏度。PCR反应体系应按照标准要求进行配置,反应条件应根据不同引物的特点进行优化。
4. 电泳分离
PCR扩增产物应进行琼脂糖凝胶电泳分离,以获得DNA指纹图谱。电泳条件应根据不同引物的特点进行优化,如电泳电压、电泳时间、电泳缓冲液等。
5. 图谱分析
DNA指纹图谱应进行质量评估和分析,如判定PCR扩增的特异性、灵敏度、重复性等。图谱分析应采用专业软件进行,如BioNumerics、GeneMapper等。
本标准还规定了质量控制、实验记录、数据分析等方面的要求,以保证DNA指纹法的可靠性和准确性。
相关标准
GB/T 18979-2003 食用菌品种鉴别方法
GB/T 18980-2003 食用菌质量安全检验方法
GB/T 18981-2003 食用菌生产规范
GB/T 18982-2003 食用菌加工规范
GB/T 18983-2003 食用菌包装规范