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罗非鱼无乳链球菌病是由无乳链球菌引起的一种疾病，主要症状为鱼体表面出现白色或黄色粘液状物质，严重时会导致鱼体溃烂、死亡。该病在养殖业中造成了严重的经济损失，因此对其进行快速、准确的诊断具有重要意义。

本标准采用双重PCR技术进行罗非鱼无乳链球菌病的诊断。具体操作步骤如下：

1. 样品处理：将罗非鱼体表面的粘液样品收集到离心管中，离心后取上清液作为PCR反应的模板。

2. DNA提取：采用商用DNA提取试剂盒进行DNA提取。

3. PCR反应：将提取的DNA作为模板，进行两次PCR反应。第一次PCR反应使用通用引物扩增目的基因片段，第二次PCR反应使用特异性引物扩增目的基因片段。

4. PCR产物检测：将PCR产物进行凝胶电泳检测，根据目的基因片段的大小和带型进行结果判定。

本标准还规定了PCR反应的质量控制要求，包括阳性对照、阴性对照和模板对照等。同时，对结果的判定也进行了详细的说明。

本标准的实施可以提高罗非鱼无乳链球菌病的诊断准确性和速度，为养殖业的发展提供有力的技术支持。

相关标准：
1. GB/T 4789.33-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验
2. GB/T 4789.35-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 肠道致病菌检验
3. GB/T 4789.36-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 耐热性芽孢杆菌检验
4. GB/T 4789.37-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 霉菌和酵母菌检验
5. GB/T 4789.38-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 食品中真菌毒素检验