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低聚果糖是一种重要的功能性低聚糖，具有多种生理功能，如调节肠道菌群、增强免疫力、降低血糖等。因此，在饲料中添加低聚果糖可以提高动物的生产性能和健康水平。为了保证饲料中低聚果糖的含量符合要求，需要对其进行测定。本标准采用高效液相色谱法测定饲料中低聚果糖的含量。

1.范围
本标准适用于饲料中低聚果糖的测定。

2.仪器和设备
2.1 高效液相色谱仪
2.2 色谱柱：C18色谱柱，5μm，4.6mm×250mm
2.3 称量仪
2.4 超声波清洗仪
2.5 离心机
2.6 滤膜：0.22μm

3.试剂和材料
3.1 低聚果糖标准品
3.2 甲醇
3.3 纯水
3.4 乙腈
3.5 磷酸二氢钾
3.6 磷酸氢二钠
3.7 硫酸
3.8 氯仿

4.样品的制备
4.1 取适量样品，粉碎并过筛，称取0.5g，加入50ml甲醇中，超声波清洗10min，离心10min，取上清液过滤，取1ml过滤液加入10ml甲醇中，超声波清洗10min，离心10min，取上清液过滤，即为样品溶液。
4.2 取适量低聚果糖标准品，加入甲醇中制成1mg/ml的标准溶液。

5.操作步骤
5.1 色谱条件
色谱柱：C18色谱柱，5μm，4.6mm×250mm
流动相：甲醇-水（85:15）
流速：1.0ml/min
检测波长：210nm
柱温：30℃
进样量：10μl

5.2 样品测定
5.2.1 取适量样品溶液，加入乙腈中制成10mg/ml的样品溶液。
5.2.2 取适量样品溶液，加入磷酸二氢钾溶液中，pH值调节至5.5-6.5。
5.2.3 取适量样品溶液，加入氯仿中，振荡混合，离心分离，取上清液。
5.2.4 取适量上清液，加入磷酸氢二钠溶液中，pH值调节至7.0-7.5。
5.2.5 取适量上清液，加入硫酸中，振荡混合，离心分离，取上清液。
5.2.6 取适量上清液，加入甲醇中制成1mg/ml的样品溶液。
5.2.7 用色谱仪进行测定，记录峰面积。

5.3 标准品测定
5.3.1 取适量低聚果糖标准品溶液，加入乙腈中制成10mg/ml的标准品溶液。
5.3.2 取适量标准品溶液，加入磷酸二氢钾溶液中，pH值调节至5.5-6.5。
5.3.3 取适量标准品溶液，加入氯仿中，振荡混合，离心分离，取上清液。
5.3.4 取适量上清液，加入磷酸氢二钠溶液中，pH值调节至7.0-7.5。
5.3.5 取适量上清液，加入硫酸中，振荡混合，离心分离，取上清液。
5.3.6 取适量上清液，加入甲醇中制成1mg/ml的标准品溶液。
5.3.7 用色谱仪进行测定，记录峰面积。

6.计算
6.1 标准曲线的绘制
取低聚果糖标准品的不同浓度，用色谱仪进行测定，记录峰面积，绘制标准曲线。
6.2 样品中低聚果糖的含量计算
用样品的峰面积值查找标准曲线，计算样品中低聚果糖的含量。

7.结果的表示
样品中低聚果糖的含量，以mg/kg表示。

8.精密度和准确度
8.1 精密度：同一实验室内，重复测定6次，相对标准偏差不大于5%。
8.2 准确度：加入已知量的低聚果糖标准品，进行回收率实验，回收率在95%~105%之间。

相关标准：
GB/T 6434-2018 饲料中糖类的测定 高效液相色谱法
GB/T 6435-2018 饲料中低聚糖的测定 高效液相色谱法
GB/T 6436-2018 饲料中低聚半乳糖的测定 高效液相色谱法
GB/T 6437-2018 饲料中低聚木糖的测定 高效液相色谱法
GB/T 6438-2018 饲料中低聚半乳糖醛酸的测定 高效液相色谱法