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猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）是一种严重危害猪类养殖业的病毒，其感染会导致猪只的生长缓慢、免疫力下降、呼吸道疾病等症状，给养殖业带来了巨大的经济损失。因此，对PRRSV的检测显得尤为重要。

实时荧光RT-PCR技术是一种高灵敏度、高特异性的核酸检测技术，已经成为PRRSV检测的主要方法之一。本标准规定了PRRSV实时荧光RT-PCR检测方法的具体步骤和要求，以确保检测结果的准确性和可靠性。

1.样品采集
样品采集应在PRRSV感染高发期进行，采集的样品包括猪鼻腔分泌物、猪血清、猪肺组织等。采集时应注意避免污染和交叉感染。

2.核酸提取
样品采集后，应立即进行核酸提取。核酸提取方法应选择适合的商用试剂盒，并按照说明书进行操作。提取后的核酸应保存在-80℃以下的冰箱中。

3.RT-PCR反应体系的制备
RT-PCR反应体系的制备应按照说明书进行，包括引物、探针、酶、缓冲液等。反应体系的制备应在无菌条件下进行，避免污染。

4.实时荧光RT-PCR检测条件的设置
实时荧光RT-PCR检测条件的设置应按照说明书进行，包括反应体系的加样、PCR程序的设置、荧光信号的检测等。检测过程中应注意避免污染和交叉感染。

5.结果判定
实时荧光RT-PCR检测结果应根据荧光信号的阈值周期数（Ct值）进行判定。Ct值小于40为阳性，大于40为阴性。同时，应进行负对照和阳性对照的检测，以确保检测结果的准确性和可靠性。

相关标准：
GB/T 22470-2008 猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测方法
GB/T 22471-2008 猪繁殖与呼吸综合征病毒核酸检测方法
GB/T 22472-2008 猪繁殖与呼吸综合征病毒灭活疫苗
GB/T 22473-2008 猪繁殖与呼吸综合征病毒活疫苗
GB/T 22474-2008 猪繁殖与呼吸综合征病毒诊断试剂