饲料是动物生产中不可或缺的重要物质，但其中可能存在着各种细菌和病毒等有害物质，对动物健康产生威胁。沙门菌和沙雷菌是常见的饲料中的致病菌，对动物健康产生严重影响。因此，对饲料中的沙门菌和沙雷菌进行检测具有重要意义。

本标准采用实时荧光PCR技术，通过检测饲料中沙门菌和沙雷菌的DNA，实现对其的快速、准确检测。具体操作步骤如下：

1. 样品制备

将饲料样品取1g，加入15mL的PBS缓冲液中，振荡混合，离心10min，将上清液转移到新的离心管中，离心10min，将上清液弃去，沉淀物用PBS缓冲液洗涤2次，最后用PBS缓冲液将沉淀物调至1mL。

2. DNA提取

将样品中的DNA提取出来，可以采用商用的DNA提取试剂盒，也可以采用自制的方法。提取出的DNA可以在-20℃保存，也可以直接进行PCR反应。

3. 实时荧光PCR反应

将提取出的DNA加入PCR反应管中，加入PCR反应液，进行实时荧光PCR反应。反应条件如下：

预变性：95℃，5min

变性：95℃，10s

退火：60℃，30s

循环放大：共40个循环，每个循环包括变性和退火步骤

相关标准
GB/T 4789.4-2016 食品微生物学检验 沙门氏菌检验

GB/T 4789.5-2016 食品微生物学检验 肠道致病菌检验

GB/T 4789.7-2016 食品微生物学检验 菌落总数和鉴定计数法

GB/T 22388-2008 饲料中细菌总数的测定

GB/T 22389-2008 饲料中霉菌和酵母菌总数的测定