大曲酯酶活力是指大曲中的酯酶在一定条件下对底物的催化能力。大曲酯酶活力的检测是大曲酿造中的重要指标之一，对于保证大曲酿造质量具有重要意义。本标准采用酶联免疫法（ELISA）进行检测，具有灵敏度高、准确性好、操作简便等优点。

1. 原理
本标准采用酶联免疫法（ELISA）进行检测。将大曲中的酯酶与特异性抗体结合，再加入酶标记的二抗，形成酶标记的抗体-抗原复合物。加入底物后，酶标记的抗体-抗原复合物与底物发生反应，生成产物。通过测定产物的光密度值，计算出大曲酯酶活力。

2. 试剂和仪器
2.1 试剂
（1）酯酶抗体：由专业生产厂家提供。
（2）酶标记的二抗：由专业生产厂家提供。
（3）底物：由专业生产厂家提供。
（4）洗涤缓冲液：0.01mol/L PBS（pH7.4）+0.05%Tween-20。
（5）稀释液：0.01mol/L PBS（pH7.4）+1%BSA。
（6）标准品：由专业生产厂家提供。
2.2 仪器
（1）微孔板洗涤器
（2）微孔板读板器

3. 操作步骤
3.1 标准曲线的制备
（1）将标准品按照不同浓度稀释，制备出一系列浓度不同的标准品。
（2）将标准品加入微孔板中，每个标准品加入3个孔位，每个孔位加入100μL。
（3）加入酯酶抗体，孵育1小时。
（4）洗涤孔位3次，每次加入洗涤缓冲液200μL，停留1分钟，弃去液体。
（5）加入酶标记的二抗，孵育1小时。
（6）洗涤孔位3次，每次加入洗涤缓冲液200μL，停留1分钟，弃去液体。
（7）加入底物，孵育30分钟。
（8）加入终止液，停止反应。
（9）用微孔板读板器测定各标准品的光密度值，绘制标准曲线。

3.2 待测样品的检测
（1）将待测样品加入微孔板中，每个样品加入3个孔位，每个孔位加入100μL。
（2）加入酯酶抗体，孵育1小时。
（3）洗涤孔位3次，每次加入洗涤缓冲液200μL，停留1分钟，弃去液体。
（4）加入酶标记的二抗，孵育1小时。
（5）洗涤孔位3次，每次加入洗涤缓冲液200μL，停留1分钟，弃去液体。
（6）加入底物，孵育30分钟。
（7）加入终止液，停止反应。
（8）用微孔板读板器测定各样品的光密度值，计算出大曲酯酶活力。

4. 结果计算
4.1 标准曲线的计算
（1）用微孔板读板器测定各标准品的光密度值。
（2）绘制标准曲线，以光密度值为横坐标，以标准品浓度为纵坐标，绘制出标准曲线。
4.2 待测样品的计算
（1）用微孔板读板器测定各样品的光密度值。
（2）根据标准曲线计算出待测样品的大曲酯酶活力。

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