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一、范围
本标准规定了槐米及其制品中总黄酮含量的测定方法。

二、引用标准
GB/T 601-2007 食品中粗蛋白质的测定
GB/T 602-2007 食品中粗脂肪的测定
GB/T 6431-2002 食品中总灰分的测定
GB/T 6682-2008 分析化学实验室水质规范及评价
GB/T 6688-2008 分析化学实验室安全规程

三、原理
样品经乙醇提取，用乙醇-水混合溶液稀释，用分光光度法测定其在紫外光下的吸光度，与标准曲线比较，计算出总黄酮含量。

四、仪器和设备
4.1 分光光度计：量程为0～2.5A，准确度为0.002A，波长范围为200～400nm。
4.2 恒温水浴器：可控制温度在25℃±1℃。
4.3 超声波清洗器：功率为100W，频率为40kHz。

五、试剂和材料
5.1 乙醇（C2H5OH）：色谱纯。
5.2 水（H2O）：去离子水或蒸馏水。
5.3 槐米样品：研磨成粉末，过筛（80目）备用。
5.4 槐花黄酮标准品：纯度≥98%。
5.5 硫酸铜（CuSO4）：分析纯。
5.6 碳酸钠（Na2CO3）：分析纯。
5.7 硫酸（H2SO4）：分析纯。
5.8 磷酸二氢钾（KH2PO4）：分析纯。
5.9 磷酸氢二钠（NaH2PO4）：分析纯。

六、操作步骤
6.1 标准曲线的制备
6.1.1 取槐花黄酮标准品0.1g，加入50mL乙醇中，超声波清洗5min，用乙醇定容至100mL，摇匀，得到1mg/mL的槐花黄酮标准溶液。
6.1.2 取1mL槐花黄酮标准溶液，加入50mL乙醇中，用乙醇定容至100mL，得到0.01mg/mL的槐花黄酮标准工作溶液。
6.1.3 取0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL和1.0mL槐花黄酮标准工作溶液，分别加入50mL乙醇中，用乙醇定容至100mL，得到0.001、0.002、0.004、0.006、0.008和0.01mg/mL的槐花黄酮标准溶液。
6.1.4 用分光光度计在360nm处测定各浓度槐花黄酮标准溶液的吸光度，绘制标准曲线。

6.2 样品的制备
6.2.1 取槐米样品0.5g，加入50mL乙醇中，超声波清洗5min，用乙醇定容至100mL，摇匀，得到5mg/mL的槐米提取液。
6.2.2 取5mL槐米提取液，加入50mL乙醇中，用乙醇定容至100mL，得到0.5mg/mL的槐米提取液。

6.3 测定
6.3.1 取0.5mL槐米提取液，加入50mL乙醇中，用乙醇定容至100mL，得到0.05mg/mL的槐米提取液。
6.3.2 用分光光度计在360nm处测定槐米提取液的吸光度。
6.3.3 根据标准曲线计算出槐米提取液中槐花黄酮的含量。
6.3.4 根据槐米样品的含量和槐花黄酮的含量计算出槐米样品中总黄酮的含量。

七、计算
总黄酮含量（mg/100g）=（样品中槐花黄酮含量×分子量×100）÷（样品中槐米的质量×1000）

八、结果表示
保留两位小数，四舍五入。

九、精密度和准确度
9.1 精密度：同一实验室内，重复测定5次，相对标准偏差不大于5%。
9.2 准确度：加入已知量的槐花黄酮标准品，回收率在95%～105%之间。

十、质量控制
10.1 仪器的校准和检验应按照GB/T 6682和GB/T 6688的要求进行。
10.2 样品的制备和测定应按照标准规定的方法进行。
10.3 每批样品应设置空白对照和质控样品，确保测定结果的准确性和可靠性。

相关标准：
GB/T 601-2007 食品中粗蛋白质的测定
GB/T 602-2007 食品中粗脂肪的测定
GB/T 6431-2002 食品中总灰分的测定
GB/T 6682-2008 分析化学实验室水质规范及评价
GB/T 6688-2008 分析化学实验室安全规程