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猪丹毒丝菌是一种常见的猪源性细菌性疾病病原体，能引起猪的丹毒病。为了保障猪肉产品的质量安全，需要对猪丹毒丝菌进行检测。本标准旨在规定猪丹毒丝菌实时荧光PCR检测方法，以提高检测的准确性和可靠性。

1. 要求
本标准适用于猪丹毒丝菌实时荧光PCR检测方法的研究和应用。检测方法应具有高灵敏度、高特异性、高重复性和高稳定性等特点。

2. 试剂
2.1 实时荧光PCR试剂盒：应选择具有高灵敏度和高特异性的试剂盒。
2.2 样品提取试剂盒：应选择适合样品类型的试剂盒。
2.3 其他试剂：如酶标记抗体、探针等。

3. 仪器设备
3.1 实时荧光PCR仪：应选择具有高灵敏度和高特异性的实时荧光PCR仪。
3.2 样品处理设备：如离心机、超声波处理器等。

4. 操作程序
4.1 样品采集：应采集新鲜、无污染的样品。
4.2 样品处理：应根据样品类型选择适当的样品处理方法。
4.3 DNA提取：应根据样品类型选择适当的DNA提取方法。
4.4 PCR反应：应按照试剂盒说明书进行PCR反应。
4.5 数据分析：应根据实时荧光PCR仪的软件进行数据分析。

5. 结果判定
5.1 阳性判定：当荧光信号曲线上升到设定阈值时，判定为阳性。
5.2 阴性判定：当荧光信号曲线未上升到设定阈值时，判定为阴性。
5.3 不确定判定：当荧光信号曲线上升到设定阈值但不符合阳性判定标准时，判定为不确定。

6. 质量控制
6.1 内部质量控制：应设置内部质量控制，包括阳性对照和阴性对照。
6.2 外部质量控制：应参加相关的质量控制评估活动。

相关标准：
GB/T 4789.30-2016 食品微生物学检验 沙门氏菌检验
GB/T 4789.31-2016 食品微生物学检验 肠道致病菌检验
GB/T 4789.32-2016 食品微生物学检验 耐热性大肠杆菌检验
GB/T 4789.33-2016 食品微生物学检验 耐热性金黄色葡萄球菌检验
GB/T 4789.34-2016 食品微生物学检验 真菌和酵母菌检验